摘 要 此实验的目的：分离臭参中主要的活性成分。方法：先用95%乙醇初步提取在经过石油醚、乙酸乙酯萃取，把得到的乙酸乙酯萃取的部分用氯仿――甲醇梯度洗脱（100：0～70：30）。结果：乙酸乙酯萃取的部分洗脱出A、B、C、D共4个部分。
关键词 臭参 活性成分 乙酸乙酯 分离
Separating the Active Ingredient Ethyl Smelly Reference Section
Abstract The purpose of the experiment： the separation of smelly and the activity of the main ingredients. Methods： preliminary extraction with 95% ethanol by petroleum ether， ethyl acetate extraction， part of the ethyl acetate extract of gradient elution with chloroform， methanol （100：0 ～ 70：30）. Results： ethyl acetate extraction part of the elution of the A， B， C， D， A total of four parts.
Key words smelly and; Active ingredients; Ethyl acetate; separation
臭参为桔梗科（CAMPANULACEAE）党参属（Sect. Codonopsis）植物心叶党参 （Codonopsis cordifolioidea P. C. Tsoong）的根，别名土党参，棱子党参，古灯茶根，古东根等，臭参根含有黄酮香豆素、挥发油、糖、氨基酸、蛋白质、生物碱、有机酸、鞣质、酚类、树脂和少量皂苷等成分，其中黄酮香豆素为其主要成分之一。①臭参在云南有野生者，家种者，但市售多为家种，其移为家种已有近百年历史。臭参产量高，价廉，资源十分丰富，每年秋冬季集市上随处可见，售量相当可观。臭参在云南具有悠久的应用史和广泛的群众应用基础。臭参的根具有补中益气，润肺生津，补肺止咳的功效，在云南作为廉价的滋补品使用，每逢秋冬季节在蔬菜市场大量销售，与同属中药党参相比，臭参还具有排除体内积气的作用，类似“以通为补”。②③
1 仪器与材料
仪器：
试剂：
柱层层析硅胶 型号：规格3，粒度：200～300目，批号：0140015（青岛海泽化工厂分厂）
植物材料：
2 提取与分离
2.1 臭参活性成分的提取
2.2 臭参活性成分的分离
2.2.1 准备工作
（1）把系统电路和液路安装好。
（2）在断电情况下，把“滤光片”安装孔中的检测波长调整到280nm，换上280nm波长的“滤光片”盒，波长数字正面向上插入孔中。
（3）打开检测仪的电源，首先让检测仪预热30-60分钟。
2.2.2 样品（液体）流向及管路连接
缓冲液体或样品→层析住→“进口”（上）→层析住（下）→检测仪“进”口（下）→检测仪“出”口（上）→恒流泵→收集试管
2.2.3 系统调试
（1）检测仪调试。
①仪器预热30～60分钟后，可对检测仪进行调试。
②检查检测仪波长是否正确。
③把“灵敏度”选择为“T”档，“T”指示灯亮，调节“T”旋钮，使“T”为“100”（此时透过率“T”为100%，显示屏显示“100”）。
④把“灵敏度”选择为“1A”档，“A”指示灯亮，调节“调节”旋钮，使“A”为零（此时透过率“A”为零，显示屏显示“0”）。
⑤用分析太平称取40g柱层层析硅胶（200～300目）于100ml烧杯中，在用量筒量取40ml三氯甲烷加入该烧杯中，用玻璃棒充分搅拌直至溶液中无明显颗粒状物，把搅拌充分的溶液装入到1.6*50普通层析住中，装柱时要连续不断、一气呵成。装好后接通恒流泵电源，调节到1ml/s的流速，使“缓冲液”流过检测仪“样品池”进行洗柱，用木棒不断敲打层析住使里面的气泡从上方排除。此时调节“T”旋钮，使透过率“T”为“100”，调节“调零”旋钮，使吸光度“A”为“0”。此时系统达到平衡，样品流过检测仪时，电脑根据样品浓度绘制图谱成一条平行于坐标轴横轴的直线时说明此时柱子已经洗干净，可以进行上样检测。
（2）收集器调试。
①准备工作。将电源线、试管盘、竖杆、安全阀、漏液报警板等正确安装和固定好。开启电源，试管盘自动复位至起点，液晶显示屏亮，全中文显示。按任意键，进入待机状态。
②滴头定位。调节滴头到第一个试管的中心位置（外圈第一管），拧紧三个固定螺丝，（竖杆固定螺丝，安全阀固定螺丝，小横杆固定螺丝），完成滴头定位。
③参数设置。设置起始管号和终止管号，设置起始时间和终止时间，设置收集时间1分钟1管的速度收集。
2.2.4 样品上样
当层析住表面的缓冲液快干时用滴管取待测样品滴加到柱子表面3～4滴即可，等到待测样品逐渐向下流使柱面快干时加入洗脱液，液面始终保持高于柱面约1ml左右。
关闭梯度混合仪的混合输出阀门（旋转方向向左），将浓缩溶液倒入左杯，打开混合阀门（旋转方向向右），让溶液经过通道渗入右杯，立即关闭混合阀门。将另一稀释溶液倒入右杯，使两杯液位相同，然后在打开混合阀门，使两液面保持平衡。打开输出阀门，根据需要的斜率，缓慢调节输出流量。
2.2.5 图像绘制
如图1所示，根据电脑根据样品内不同的物质浓度绘制出图谱（若绘出的图谱出峰太小，可改变菜单中“灵敏度”选择），乙酸乙酯部分经氯仿―甲醇梯度洗脱（100：0～70：30），⑤得到A、B、C、D共4个部分。
3 实验结果
在00：02时出现了一个较高的波峰，说明这个时间出来的物质含量较高。到00：05时又一个较高的波峰，说明此时出来的物质含量很大，到00：06时波峰又达到了顶值，说明此时又有含量很大的物质流出，在00：08时波峰达到顶值，说明有大量的物质流出。到00：14后图像逐渐形成趋势于横轴的直线但存在很多的波动。此次实验说明了臭参原材在经过索氏提取法提取和萃取后的乙酸乙酯部分分离出了4个部分的活性成分。
注释
