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单味中药协同诱导小鼠CIK 的初步讨论

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单味中药协同诱导小鼠CIK 的初步讨论
时间:2022-09-19 02:46:28     小编:韩睿

细胞因子诱导的杀伤细胞( cytokine induced killercell,CIK) 作为一种高效的肿瘤杀伤细胞,在肿瘤过继免疫治疗中显示出良好效果,在人类CD+3CD+ 56的T 细胞是CIK 群体中主要效应细胞。小鼠CIK 细胞,表面高表达NK1. 1 和CD8分子。国内也有不少关于中药协同DC 或CIK 杀伤肿瘤的报道,但目前人们对其研究大多集中在临床应用。笔者对于将小鼠脾淋巴细胞诱导为CIK 进行了研究,成功用纯细胞因子诱导出了小鼠CIK 细胞,且明确了诱导方法。在此基础上,本研究以加入几种中药水煎剂同时细胞因子用量减少为原来的1 /2,探讨中药协同诱导小鼠CIK 的可行性。

1 材料与方法

1. 1 实验材料

实验动物为C57BL/6 小鼠,6 ~ 8 周,雄性,购自北京维通利华实验动物技术有限公司( 合格证号: 11400700073629) ; 中药材虫草、石斛、黄精、仙茅、黄芪、人参、灵芝及半支莲购自北京同仁堂制药有限公司; 重组小鼠IL - 1、IL - 2、 - IFN 购自Peprotech 公司; 小鼠CD3单抗( 145 - 2C11) 、荧光标记单抗NK1. 1 - PE、CD3e - APC、CD8 - FITC 和DX5 - FITC 购eBioscience 公司; 小鼠淋巴细胞分离液( 达优) 购自达科为生物技术有限公司; 1640 培养基、胎牛血清、青链霉素购自GIBCO 公司; CCK - 8杀伤试剂盒购自东仁化学科技( 上海) 有限公司。

1. 2 小鼠外周淋巴细胞制备C57BL /6 小鼠行眼球摘除放血后拉颈处死,无菌条件下取脾脏,分离脾细胞,加入到小鼠淋巴细胞分离液中,密度梯度离心法获取小鼠淋巴细胞,无血清1640 培养基洗涤两次,用1640 调整细胞浓度为1 106 /ml。

1. 3 中药药液制备将1. 1 所列中药材剪碎放入煎药锅中,加入适量超纯水,中火力煎制,务使其保持微沸状态煎20 min,弃药渣,调节药液体积达1 g 生药对应10 ml 药液。分装后冻存于- 20 ℃冰箱。

1. 4 确定最适用药浓度如1. 2 所述制备小鼠淋巴细胞,并铺入96 孔细胞培养板,放在37 ℃、5%CO2孵箱中过夜孵育后,按浓度梯度( 浓度范围200 ~ 0. 032 g /ml) 在各孔中加入中药水剂,后经CCK - 8 检测,获得每种药剂最适使用浓度。

1. 5 小鼠淋巴细胞的诱导

1. 5. 1 纯细胞因子诱导1. 2 方法制备的小鼠淋巴细胞置培养瓶中,培养基为含10% 胎牛血清和1 500U/ml - IFN 的1 640,于37 ℃、5% CO2培养,24h 后再向每孔培养基中均加入抗CD3单抗( 50 ng /ml) 、IL - 1 ( 200 U/ml) 、IL - 2 ( 300 U/m1) 。以后每3 天更换含相同浓度血清和IL - 2 的培养基。

1. 5. 2 单味中药协同诱导将1. 5. 1 方法中所用细胞因子的量减少至原来量的1 /2,同时加入相应最适浓度的中药水煎剂,其他培养条件及方法与1. 5. 1 相同,诱导效果由流式检测作为评价方法。

1. 6 诱导细胞的流式检测取培养2 周的细胞进行流式细胞检测。将细胞用0. 2% BSA 的PBS ( 流式检测Buffer) 洗涤两遍,再用该Buffer 重悬,调整细胞浓度为1 106 /ml。将4 种荧光标记抗体双染组合( NK1. 1 - PE + CD3e - APC、NK1. 1 - PE + CD8 -FITC、CD3e - APC + CD8 - FITC、NK1. 1 - PE +DX5 - FITC) 分别稀释于50 l 冰冷的流式Buffer 中,再分别向各管抗体中加入50 l 细胞悬液,混匀,置4 ℃避光反应30 min; 用冷Buffer 洗涤两遍,每次1ml。最后用100 l 冷Buffer 重悬细胞,上流式细胞分析仪检测。阴性对照用未诱导的小鼠脾细胞。

1. 7 诱导细胞杀瘤活性

检测依据流式检测结果,将CIK 细胞特征性表面分子表达高的协同组分别与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 混合培养,效靶比分别为: 50 ∶ 1、25∶1、10∶ 1。用CCK - 8 试剂检测其对上述肿瘤细胞的杀瘤活性。杀伤活性计算公式为: 杀伤率% = 1 -( 实验A 值- 空白孔A 值) /( 对照孔A 值- 空白孔A值) %。

2 结果

2. 1 通过梯度稀释的中药水煎剂作用于小鼠淋巴细胞,后用CCK - 8 检测,得出各药促进细胞生长的最适浓度,用于接下来实验的使用浓度依据。

2. 2 不同中药水煎剂协同诱导的细胞经流式检测,与纯细胞因子诱导的相比,其中虫草、石斛、仙茅、黄芪4 种药剂可以在所诱导细胞表面表达与之相近量或更多的CIK 特征性分子( NK1. 1 + CD+8、CD+3CD8+、NK1. 1 - DX5 - ) 。

2. 3 虫草、石斛、仙茅、黄芪协同诱导的细胞和小鼠SP2 /0细胞按不同效靶比混合培养后,用CCK - 8试剂检测杀伤活性,结果显示石斛、仙茅和虫草组在效靶比较高时杀伤活性亦高,效靶比较低时杀伤活性差,黄芪组在中等效靶比时显示出杀伤效果,而高和低效靶比时无杀伤作用综上结果可以得出: 虫草、石斛、仙茅、黄芪4种中药水煎剂协同细胞组合诱小鼠脾细胞,所得到的细胞表面NK1. 1、CD3、CD8高表达,与纯细胞因子诱导得到的细胞相比,CD3、CD8双阳性率更高,且该4 种细胞对肿瘤细胞的杀伤作用明显,符合CIK 细胞的特征。因此,这4 种中药水煎剂可以协同细胞因子成功将小鼠脾淋巴细胞诱导为CIK 细胞。

3 讨论

很多中药在临床上有调节免疫的功能,实验也证明它们可直接作用于各类免疫细胞,如促进其活化和增殖、增强其功能等。因此二者结合,探讨中药是否可以在体外诱导和增强CIK 的作用是很有意义的。作为初步研究,本研究所选中药是在临床和实验中早已证明具有调节免疫及在抗肿瘤中常用到的单味药,并且使用的是中药的水煎剂。在这个基础上,可进一步探讨方剂及药物单一成分对CIK 诱导和功能发挥的作用。

本研究所选中药中,有4 种中药( 虫草、石斛、仙茅、黄芪) 的水煎剂可以在减少细胞因子用量的情况下,有效诱导小鼠淋巴细胞表达CIK 特征性表面分子。对其所诱导的CIK 进行杀伤小鼠肿瘤细胞实验,结果表明与纯细胞因子诱导的CIK 相比,石斛、仙茅和虫草组在效靶比较高时杀伤活性高,其中石斛和虫草组效果相对更好,仙茅效果较差。效靶比较低时中药各组杀伤活性差,黄芪组在中等效靶比时显示出杀伤效果,而高和低效靶比时无杀伤作用。这其中原因可能是: CIK 本质上是一群异质性细胞,不同中药参与诱导的细胞群成分有所差异。另外,本研究所诱导的CIK ( 包括纯因子诱导的) 与前期工作中用纯因子诱导的CIK 在表面分子表达百分比上也有所不同( 本次CD+3CD+8占优) ,可能原因为本研究诱导中 -IFN 和IL - 1 用量高于前期研究。

综上所述,本研究初步明确了利用中药在体外协同或促进CIK 的诱导是可行的研究方向。进一步深入研究建立用于筛选可诱导CIK 效应细胞或可增强CIK杀伤肿瘤效果的中药及有效成分的体外模型系统,对阐明其作用机制有着积极意义和前景。

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语言是抽象的事物,不是可以量化到上几节课或学习几年就可以学好的,学本民族语言如此,学习英语更是如此语言的学习重在兴趣的培养,环境的创设,只要教学得法,便可事半功倍要取得这样的好效果,趣味教学可以说是一种好方法。 中学生......
小儿斑秃药物治疗的研讨
发布时间:2023-05-06
斑秃,中医称其为“油风”,俗称“鬼剃头”。为一种突然发生的局限性脱发,可发于任何年龄,近年来在小儿中发病也不少见。医学认为,本病为自身免疫性疾病,与遗传因素、精神因素、免疫功能、内分泌、微循环及微量元素等异常有关。斑秃是......
基本理论浅析满意协同度与主导满意战略类型
发布时间:2014-01-13
以下为查字典论文网为您编辑的:“基本理论浅析满意协同度与主导满意战略类型”,敬请关注!!基本理论浅析满意协同度与主导满意战略类型一、 满意度及其引申问题 这一问题的现实映照在于企业与社会之间是否能保持和谐发展。具体而言,办企......
师生互动的协同机制:论要素解构与策略探讨
发布时间:2023-02-06
" 论文摘要:师生互动是课堂教学的重要环节,按照协同理论,师生互动的“协同机制”要素应包括开放性、竞争、协同和自组织。师生互动“协同机制”的实践价值包括活跃集体氛围、提升合作意识,促进思维开发、益于能力提升,等等。建立“......
讨论中药汤药剂的煎煮方法与服用方法
发布时间:2022-10-14
汤剂、冲剂、浓缩丸、糖浆剂、口服液等都将药物经过煎煮,去滓取汁而制成。煎煮是否适当对疗效有一定的影响,特别是临床最常用的汤剂,它是根据物性质及病情差异而采用小同的煎煮方法。因此,掌握和注重中药的煎煮与服用方法非常必要。......
关于劳动合同立法若干问题的初步研究(上)(1)论文
发布时间:2013-12-18
现实需要劳动合同立法的再一次突破 我国的劳动合同立法,第一次突破是1986年国务院发布的《国营企业实行劳动合同制度暂行规定》。它第一次以劳动法规的形式对中国实行劳动合同制度这一世界通行做法加以肯定。但该《暂行规定》的适用范......
关于劳动合同立法若干问题的初步研究(下)(1)论文
发布时间:2023-07-22
对劳动合同立法中的几个具体问题的看法 3、关于连带责任问题。 违反劳动合同可以追究连带责任。这里的连带责任一般是指,劳动法律关系的一方主体(通常是劳动者一方),以不公正或违法手段破坏原劳动合同关系而建立新的劳动关系,......
咪唑斯汀对小鼠接触性皮炎的治疗作用及机制讨论
发布时间:2016-12-12
反应性接触性皮炎( allergic contact dermatitis,ACD ) 是由抗原特异性T 细胞介导的皮肤过敏性疾病,通常是由皮肤直接接触化学物质所致。随着社会经济的发展,ACD 逐渐成为一种普遍的职业病。大量研究表明多种细胞因子,如IFN - 、IL......
小学英语趣味教学方法探讨
发布时间:2017-03-29
摘 要:对小学生来说,对英语的学习有没有兴趣很大程度上取决于教师能否根据小学生的身心发展规律、学习规律,小学英语课程教学的特点、具体要求,运用灵活多样的教学方法,创设充满趣味的课堂,激发学生学习学习兴趣,让学生在愉快的......
初中英语趣味教学谈
发布时间:2013-12-19
" “语言这东西,不是随便可以学好的”,学本族语如此,学习英语更是如此。但是如果教学得法,便可事 半功倍。要取得这样的好效果,趣味教学可以说是一种好方法。 中学生这个年龄的特点是:爱说爱动,自我约束、自我控制能力不强......
试论孔子“启发诱导”原则对教师的要求
发布时间:2023-05-16
" 论文摘要:孔子的教育思想博大精深,在中国教育史乃至世界教育史上都有着举足轻重的地位。他为世人所推崇的不仅仅是他的“仁义”道德思想,还有他总结归纳出的一系列的教育教学思想。“启发诱导”就是他提出的最重要的教学原则之一,......
初中英语趣味教学谈
发布时间:2014-01-17
论文对绝大多数的朋友们来说是必不可少的,为了让朋友们都能顺利的编写出所需的论文,论文频道小编专门编辑了“初中英语趣味教学谈”,希望可以助朋友们一臂之力!"语言这东西,不是随便可以学好的",学本族语如此,学习英语更是如此。但......
小学生习作起步阶段指导策略
发布时间:2023-01-12
摘 要:作为教师的我们,要让学生爱上作文,喜欢习作。老师可以给学生多推荐借阅一些优美动人的童话、故事等,在学生积累语言的同时,享受好故事、好文章带来的阅读乐趣,调动自身的写作热情。我们每天的生活就是最好的作文素材。所以......
我国中小企业国际贸易融资问题初步研究(1)论文
发布时间:2013-12-19
论文摘要:随着我国经济体制改革的深入,中小企业在国民经济中发挥着越来越重要的作用,融资问题是中小企业在发展中遇到的最大瓶颈。近年开展的国际贸易融资方式成为促进中小企业发展外贸业务的重要融资渠道。 论文关键词:中小企业; ......
基于药物转运体的中药引经作用机制讨论
发布时间:2016-12-05
中医理论认为,在方剂配伍中通过运用引经药可改变其它药物的作用方向,使其作用侧重或集中于特定的部位,使药效靶向集中,从而提高疗效。这些具有改变其它药物作用方向的药物称为引经药。引经药的使用,是中医遣方用药的一大特色,极大......
小班幼儿感恩起步教育初探
发布时间:2016-07-26
感恩就是乐于把得到好处的感激呈现出来且回馈他人。感恩不但是美德,还是一个人之所有为人的基本条件,懂得感恩是一个人最起码的道德品质。面对幼儿园小班孩子年龄小,以自我为中心的特点,如何让他们具有感恩之心?如何使他们怀着感恩......
论初中英语语法趣味性教学模式
发布时间:2016-05-12
摘 要:英语语法是初中英语学习的重要内容,贯穿于英语学习的每一部分,对学生的学习效果有着非常重要的影响。由于英语语法较枯燥,很多学生对英语语法产生一种抵触情绪,这不利于学生进一步学习英语,必须要探究趣味教学模式来促进学......
钢材贸易项下仓单质押贷款初步研究
发布时间:2022-07-29
钢材贸易项下仓单质押贷款初步研究 钢材贸易项下仓单质押贷款初步研究 钢材贸易项下仓单质押贷款初步研究 近年来,各级金融机构在拓展钢材贸易项下贷款业务方面取得了令人瞩目的成就。但在业务快......
对现代德育工作模式的初步探讨
发布时间:2013-12-18
" 以推进创新精神和实践能力为核心的素质教育,是培养跨世纪人才的必然要求。德育是全面发展教育的组 成部分,是素质教育不可或缺的重要内容,也是实现素质教育目标的重要保证。素质教育向德育工作提出更高 、更严格的要求,也为德育工作......
有诗味的小说
发布时间:2023-05-20
读寒郁的小说时,常常会产生错觉,好像自己变成了古人。寒郁的小说,慢,沉静,有诗味。这样的作者首先是自信的,不担心抓不住读者,不在乎机巧和关窍,也不皱着眉头地筹谋,来个遽然提速或篇末翻转什么的。寒郁不吓唬读者,也不腆着脸地献媚于读者,他心平气和轻拢慢捻,拨动着世间的弦,一曲终了,余音丝丝缕缕,还会在空气中蜿蜒良久。三岛由纪夫在文学讲义中谈到过|井基次郎的《柠檬》,说这部著名的短篇,“把一颗柠檬写得历.........
如何进行小型水电站的初步设计
发布时间:2023-07-09
如何进行小型水电站的初步设计 1.设计图纸部分 ⑴工程地理位置图;计算电站至县城的距离,输电线路的距离。 ⑵工程河流水系图;计算坝址、厂房的集雨面积,河流的长度、坡降。 ⑶工程枢纽布置图;计算挡水坝基础数据,地面高程、挡水坝......
刍议高校图书馆与中小企业协同创新服务
发布时间:2015-08-17
[摘 要]高校图书馆与中小企业协同创新具有很多优势,面对协同创新的机遇,高校图书馆应充分利用信息资源数量多、结构合理等优势,结合中小企业技术创新特点,为中小企业量身定做协同创新服务模式,真正成为中小企业技术创新的重要合作......
谈初中物理教学的趣味性
发布时间:2023-05-14
" 物理学作为一门重要的自然科学的基础科学,今日已经是现代科学技术的中心学科之一。无论是工农业生产和国防现代化,还是信息技术与纳米技术等先进科学技术都离不开物理学的许多基础理论。每一个“四化”建设者也必须具备一定的物理基础......
协同创新软件工程专业协同育人模式
发布时间:2023-06-02
[摘要]本文分析当前地方院校软件工程人才培养定位不明确、现有课程体系设置不科学、现有实践教学模式无法推广、现有教学质量监督体系不完善等人才培养现状和存在的问题,从协同创新理念的角度提出适合地方院校的应用创新型软件人才的协同育人培养模式。该模式从协同机制建设、课程设置体系、实训教学体系、质量评价体系四个核心环节入手协同培养新工科背景下地方院校软件工程人才,从而实现学校人才培养和企业岗位需求的无缝对接.........
浅析初中化学趣味化实验教学论文
发布时间:2023-06-14
摘要:文章通过分析初中化学教学中运用趣味化学实验的重要性,提出初中化学教学中趣味化学实验运用的有效策略,即由趣味化学实验引入课题,激发学生的学习兴趣;设计课外实验,强化学生的化学学习;合理利用趣味化学实验,变抽象知识为形象知识。关键词:初中化学;趣味化实验;探究能力;化学是一门建立在实验基础上的学科。教师在实际的化学教学中设计一些操作简单富有趣味性的小实验,对活跃化学课堂氛围有积极的作用,也提升了.........
声学同步练习
发布时间:2013-12-19
声学同步练习 1.声音由物体的________产生,________停止,发声也停止. 2.声音的传播需要_____________, 不能传声.15℃时空气中的声速是___________. 3.物体每秒振动的次数叫做_______,单位是________,简称为______,符号为___......
初中数学的小论文
发布时间:2018-06-13
数学是一门基础学科,对于广大中学生来说,数学水平的高低,直接影响到物理、化学等学科的学习成绩,数学的重要地位由此可见。下面我们来看看初中数学的小论文,欢迎阅读借鉴。浅谈初中数学学习的几点关键摘要:数学是一门基础学科,对于广大中学生来说,数学水平的高低,直接影响到物理、化学等学科的学习成绩,数学的重要地位由此可见。下面就谈下初中数学学习的几点关键。关键词:概念;例题;练习;初中数学一、深刻理解概念概.........
集中与协同——网络财务的精髓
发布时间:2022-08-26
集中与协同——网络财务的精髓 网络财务的兴起,为财务管理引入了一个崭新的模式,并成为财会领域研究的热点问题。笔者仅就这一问题进行分析与探讨。 一、网络财务及其三重特征 1.网络......
企业兼并中的财务协同效应
发布时间:2022-07-24
企业兼并中的财务协同效应 企业兼并中的财务协同效应 企业兼并中的财务协同效应 一、财务协同效应及其意义 20世纪70年代以后,兼并活动已从单纯的横向兼并、纵向兼并发展为混合型兼并,从财务管理的角......
低价背光键鼠套装导购
发布时间:2022-09-14
除了单身生活之外,很多用户群体往往因为居室条件的限制而无法在夜间开灯使用电脑。这个时候,背光键鼠套装就成了最好选择。不过虽然背光键鼠更易关灯操作,其背光效果也需要恰到好处才行。 背光键盘技术 背光键盘曾经是高端游戏......
初中化学实验的趣味化研究
发布时间:2016-01-08
摘要:在化学实验教学中加强化学实验的启发性、探究性及趣味性的研究,一是用千变万化的实验现象唤起学生学习化学的兴趣;二是采用探究式实验教学模式,营造良好的研究实验气氛;三是强化演示实验教学,把更多的机会给学生;四是主动设计......
浅谈初中物理教学中的趣味性
发布时间:2013-12-19
" 物理学作为一门重要的自然科学的基础科学,今日已经是现代科学技术的中心学科之一。无论是工农业生产和国防现代化,还是信息技术与纳米技术等先进科学技术都离不开物理学的许多基础理论。每一个“四化”建设者也必须具备一定的物理基础......
谈谈初中物理教学中的趣味性
发布时间:2022-12-14
" 物理学作为一门重要的自然科学的基础科学,今日已经是现代科学技术的中心学科之一。无论是工农业生产和国防现代化,还是信息技术与纳米技术等先进科学技术都离不开物理学的许多基础理论。每一个“四化”建设者也必须具备一定的物理基......
初中英语趣味教学漫谈
发布时间:2023-04-05
摘要:趣味教学能够让学生更好地参与到教师开展的教学活动当中,所以教师在教学的过程中应该积极转变传统的教学方法,从而增强教学内容的趣味性。根据学生的发展特点就如何增强教学内容的趣味性提出了有关策略。关键词:初中英语;趣味教W;多媒体趣味教学是现在教学发展的新名词,教师在教学的过程中增强教学内容的趣味性不仅能够提高学生对知识的认识能力,还能让学生将英语与实际生活进行有效联系,从而提高学生的英语水平。一.........
浅谈初中英语趣味教学
发布时间:2023-02-01
“语言这东西,不是随便可以学好的。”学本族语如此,学习英语更是如此。但是如果教学得法,便可事半功倍。要取得这样的好效果,趣味教学可以说是一种好方法。 爱因斯坦说过:“兴趣是最好的老师。”因此,笔者认为,趣味教学的核心......
SM的一小步,中韩流行文化的一大步
发布时间:2023-02-06
“哥们,拜拜,有机会再同台吧!”就在去年鹿晗与SM公司解约之时,EXO另一名中国成员张艺兴给他送上这样的祝福。言犹在耳,接下去张艺兴的身影也频频出现在中国市场,加盟国产电影,参与《快乐大本营》、《奔跑吧兄弟》等综艺节目录制......
小松鼠等 2014年23期
发布时间:2022-11-16
小松鼠 陈迎 小松鼠,真友好, 又蹦又跳尾巴摇。 好像在说欢迎你, 请到我家瞧一瞧。 它的家,实在小, 我的头也进不了。 我说松鼠别客气, 送个松果给我咬。 小梳子 陈迎 小梳子,爱数数, 每天去把头发数......
利多卡因微乳凝胶剂的制备及初步药效学探究
发布时间:2016-06-06
利多卡因又名赛罗卡因,可用于多种形式的局部麻醉,是一种常用局麻药,能够暂时阻断神经纤维的传导而具有麻醉作用,使疼痛阈值升高,从而缓解局部疼痛,具有起效快、穿透能力及扩散性较高、止痛作用迅速、作用时间长、刺激性较小且毒性......
北美森林里的小花栗鼠
发布时间:2022-08-15
在深秋的森林里住着一对花栗鼠,一只是年轻的小花栗鼠,勤快勇敢聪明,另一只是老花栗鼠,狡诈偷懒。 秋天到了,橡树的果子成熟了,大量的橡果从老橡树上落满了一地,树林里还有一头肥壮的驯鹿。它们都在抢吃橡果。花栗鼠个体娇小,......
韦伯《f小调第一单簧管协奏曲》解析
发布时间:2023-05-12
摘 要:韦伯是十九世纪杰出的浪漫主义作曲家,其于1786年出生于德国,在其短暂的一生中拥有众多不朽的作品。韦伯擅长创作以单簧管为主奏乐器的曲子,在其谱写的单簧管协奏曲中以《f小调第一单簧管协奏曲》最为出名。本文主要解析韦伯......