市区农贸市场中大豆的检测 市区农贸市场中大豆的检测 市区农贸市场中大豆的检测
1材料与方法 2结果与分析 3结论与讨论
东北是我国大豆的主产区,然而受地理位置的约束及产量不稳定等因素的影响,每年国内的大豆产需出现严重的不均衡,与此同时,由于国外转基因大豆存在成本低,出油率高等优势,对国内的大豆种植市场产生严重冲击[6-7],因此中国每年从国外进口大量的转基因大豆,国内90%以上大豆油源于进口转基因大豆[9]。进口转基因大豆一般只用于油料的生产,但其一旦流入种子市场将会对国内传统大豆造成基因污染[10]。
因此本实验对广州市农贸市场中是否存在转基因大豆进行初步筛查。目前转基因食品的检测方法主要有2种[2],一是针对转基因食品中外源基因的表达产物—蛋白质的检测,如酶联免疫吸附法、蛋白质印记法、“侧流”型免疫测定法,二是针对转基因食品中的外源DNA的检测,如DNA的定性、定量PCR法检测。
相比于蛋白的检测,基于DNA的检测方法灵敏度更高,应用也更加广泛,因此本实验采用定性PCR的方法对收集的样品进行检测。大豆中蛋白含量比普通植物材料高,本实验中采用行标的方法对大豆基因组进行抽提,通过两步蛋白抽提,充分去除DNA中的蛋白质。
结果发现最终提取的基因组DNA条带清晰单一,OD260/OD280均为1.6~1.9,纯度较高,无蛋白质和RNA污染。大豆凝集素Lectin基因是大豆特有的内源基因,常作为PCR检测的内参基因,本实验中以之为靶基因进行PCR检测,在转基因阳性和阴性样品以及14份未知样品中都检测到Lectin条带,表明通过改进的方法提取的大豆基因组DNA的纯度较高,可用于PCR检测,且最终的PCR反应体系和条件也满足PCR反应要求。
采用3对外源基因引物进行外源基因的检测,分别扩增调控元件CaMV35S、NOS以及功能元件EPSPS基因,由于西兰花、卷心菜、花椰菜、甘蓝等十字花科植物在自然条件下很容易感染花椰菜花叶病毒(CaMV),因此在大豆DNA中检测到CaMV35S不能确定其为转基因大豆[11],而另外一个筛选基因为NOS终止子,NOS终止子一般只存在于用于转化植物使用的农杆菌中,其检测阳性不能确定是转基因大豆。当某样品检测到CaMV35S启动子和NOS终止子皆为阳性时,便可以初步判定为转基因作物,而对功能元件EPSPS等基因作为植物转化所转入的目的外源基因,对其检测可与CaMV35S、NOS的检测结果共同作为转基因大豆检测的标准,当对样品进行检测的3个外源基因皆为阳性时即可确认该样品为转基因大豆。
本实验从广州农贸市场中收集了14份大豆,经检测有1份样品为转基因大豆,说明转基因大豆已进入流通领域和日常食品生产中,未达到有效的监管。我国目前并没有批准转基因大豆种子的种植和生产,在广州市场上转基因大豆不仅没有按要求进行转基因标识,也没有合法来源,违反了国家关于转基因种子生产和销售的相关法律法规,其非法流通和违规种植就可能对国内的传统大豆造成污染,影响我国的大豆种植安全并可能对物种多样性造成严重威胁,需要引起有关部门和研究机构的关注。