摘要采集疑似链球菌病的猪病料进行细菌分离,根据培养特性、染色特点、形态观察、生化试验鉴定为1株猪链球菌;药敏试验表明,该分离菌株对氨苄西林、包孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感,对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感,对红霉素、青霉素低度敏感,而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。
关键词猪链球菌;分离鉴定;药敏试验;广西钦州
1材料与方法
1.1试验材料
试验病料为采自广西钦州地区某猪场疑似猪链球菌发病的仔猪淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织。试验试剂为:绵羊血琼脂平板、绵羊血琼脂斜面、普通琼脂培养基、营养肉汤、巧克力培养基等,均按常规方法制备,4 ℃冰箱保存备用;药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司;细菌微量发酵管购自杭州天和微生物试剂有限公司。 采用无菌法将采集的疑似链球菌病发病的仔猪淋巴结、肺、脾、扁桃体等病变组织,划线接种于含有8%绵羊血的琼脂平板、巧克力培养基和营养琼脂平板中,37 ℃培养24 h,观察细菌生长特性。挑取绵羊血平板上针尖大小、表面光滑、灰白色、圆形、半透明、边缘整齐的单个菌落进行革兰氏染色。革兰氏染色阳性、有链状排列或成对的球形细菌为可疑菌落,接种于葡萄糖肉浸液肉汤液体培养基内进行增菌培养,37 ℃纯培养24 h后再次进行革兰氏染色,对镜检为革兰氏染色阳性、成对、短链球菌,再做接触酶试验,结果为阴性者,即确定为猪链球菌,接种于绵羊血琼脂斜面上,置于4 ℃冰箱中保存备用。
1.3生化试验
将分离菌株分别接种于木糖、麦芽糖、蔗糖、菊糖、肌醇、阿拉伯糖、葡萄糖、乳糖、棉子糖等微量生化反应管中,同时做MR试验和VP试验,37 ℃培养24 h后,观察其生化反应特性。
1.4药敏试验
采用纸片扩散法。将所保存的纯化菌株分别在37 ℃营养肉汤中培养24 h,用无菌生理盐水将菌液稀释至浓度约为200万个/mL,用无菌棉拭子蘸取菌液,均匀涂布于营养琼脂平板,待稍干后,将各种抗生素药敏纸片平贴于培养基表面,并轻按纸片中心,使其附着严密,37 ℃培养24 h后,观察、测定抑菌圈的直径。判定猪链球菌对药敏纸片的敏感性标准:抑菌环直径在15 mm以上为高度敏感;10~15 mm为中度敏感;10 mm以下为低度敏感;无抑菌环为不敏感。
2结果与分析
2.1培养结果
分离菌在绵羊血琼脂平板上菌落直径为0.5~1.0 mm、灰白色、半透明、表面光滑、圆形、边缘整齐,呈α溶血;巧克力培养基上菌落特征与绵羊血平板菌落特征相似;革兰氏染色阳性、有链状排列或成对的球形细菌;在普通培养基中不能生长。
2.2生化试验结果
分离菌株接种于各个微量生化反应管,同时做MR试验和VP试验,结果见表1。
2.3药敏试验结果
对分离培养获得的纯培养物进行药敏试验,结果见表2。由表2可知,该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感,对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感,对红霉素、青霉素低度敏感,(上接第338页)
而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。
3结论与讨论
从采集的疑似链球菌病的猪病料中分离到1株细菌,根据培养特性、染色特点、形态观察、生化试验鉴定为猪链球菌。药敏试验结果表明,该分离菌株对氨苄西林、头孢他啶、万古霉素、头孢氨苄、克林霉素、恩诺沙星高度敏感,对多黏菌素、环丙沙星、卡那霉素中度敏感,对红霉素、青霉素低度敏感,而对土霉素、四环素、强力霉素、复方新诺明有明显耐药性。该菌株存在多重耐药性。
由于各地用药习惯以及近年来抗生素的滥用,产生了大量的耐药菌株,为疾病的后续治疗产生了很大的影响,也使得疾病更加难以控制。因此,建议临床用药前,有条件的先进行菌株的药敏试验,根据试验结果进行指导用药,并注意穿梭用药,避免耐药菌株的出现。
4参考文献 [2] 赵华梅,潘秀珍,唐家琪.猪链球菌毒力因子和鉴定方法的研究进展[J].微生物学杂志,2006,26
(1):77-80. [4] 付薇,陈进喜,覃芳芸,等.猪链球菌9型cps9G基因的克隆与序列分析[J].动物医学进展,2009,30
(1):1-4.
[5] 王丽平,陆承平,唐家琪.链球菌对大环内酯类抗生素的耐药性及耐药表型[J].南京农业大学学报,2004,27
(4):81-84.
[6] 闫若潜,赵明军,张志凌,等.河南省致病性猪链球菌血清型及耐药性状况调查[J].河南畜牧兽医,2007,28
(5):25-27.
中国 www.LWlM.Com