家禽血液样品的采集技术及应用
摘要:血液样品采集技术直接影响血样的质量,进而影响到免疫效果和疫情监测结果的准确性。综合业内常用的各种作法,结合实践体会,对翅内侧翼下静脉采血、跖骨内侧静脉采血、右侧颈静脉采血、心脏采血等采血方法及血清的制备方法,就操作要领、方法应用与选择(家禽种类及日龄、需要血量多少)、方法评价等进行了较为详细的描述和总结,对血液样品采集过程中各关键操作环节提出了注意事项。
关键词:血液样品;家禽;采集 www.Lwlm.com 养禽场对免疫后的抗体监测及疾病感染情况的检测是禽类疫病防控的重要手段,家禽血液样品的采集(主要是血清样本)是一项重要的常规性和前提性工作,血样质量的好差,直接影响到监测结果的准确性。正确的血液样品采集技术是采血质量的前提保证。笔者结合长期的实践体会,主要针对家禽血液样品的采集、血清的制备及注意的问题进行介绍。 1器材的准备 采血器(常用5mL一次性塑料注射器)、血样收集管(有盖试管或V形管,并贴好标签,便于登记)、试管架、5%碘酊棉球、75%酒精棉球、一次性塑料离心管、离心机、胶布或标签纸、记号笔、相关表格等。 2采血方法 采血方法的选择,主要取决于采血的目的、所需血样或血清的数量以及家禽的种类、年龄等。凡用血量较少的检验如血液涂片、鸡白痢全血平板凝集试验等,可刺破冠、脚蹼皮下静脉等组织,以吸管或毛细吸管直接取新鲜的血液;用中量血时可从静脉血管采集;当需血量较多时可以从心脏采集。雏鸡(1～30日龄)、水禽可采用跖骨内侧静脉采血法,成鸡(30日龄以上)可采用翅内侧翼下静脉采血法。 2.1翅内侧翼下静脉采血法 此法适宜于30日龄以上的家禽,尤其是成鸡,不适用于雏禽和水禽。雏禽翼下静脉较细,且水禽羽毛丰厚,采血时须拔去绒羽会造成皮下毛细血管血液渗出,不易看清静脉位置,另外翅内侧皮肤松软,血管位置不容易控制,采血时容易滚针,造成翅部瘀血,影响其活动及采食,也容易造成感染,影响经济效益。 对于鸡等体重较轻的家禽,助手以一手固定禽的两只腿,另一手固定两翼,腹部朝外,助手握两翼的手稍高于另一手,暴露出翅膀内侧。采血员左手使禽翅膀展开,露出腋窝部,拔去该部羽毛,可见到由翼根进入腋窝的一条较粗的静脉,即翼根静脉。其远心端有一条较细的静脉,即翼下静脉。用5%碘酊和70%酒精棉球分别依次消毒暴露静脉处的皮肤,待酒精挥发干燥后采血。术者用左手拇指压迫翼下静脉的近心端,使血管怒张,右手持带5#~7#针头(由于家禽静脉较细,尽量选择小号)的采血器,由翼根向翅尖方向(血流的相反方向),以针口斜面向上,约与皮肤呈15°角沿静脉刺入血管内,见血液回流,即可抽取血液[1]。持针时手要稳,进针不宜过深,如刺穿血管,则很快引起皮下血肿,导致采血失败。抽血速度一定要缓慢,否则会使血管内壁互相粘连或针尖斜面紧贴血管内壁而采不出血并出现气泡。采血完毕后,局部消毒并适当压迫针孔处30s后即可止血。 2.2跖骨内侧静脉采血法 优点:①易于保定,血管位置明显,血管不易滚动;②各个日龄的禽只均适用,尤其适用于水禽[2]和雏禽。 助手一手固定两翼根部,另一手固定一脚,使禽侧卧,禽脚朝向采血者。采血者左手固定另一脚,按住跖骨内侧的静脉,使腿部静脉突起,常规消毒后,右手持5#采血器与跖骨皮肤呈10°角顺血管方向进针取血[3]。跖骨内侧静脉采血是向心方向采血,采血时要注意进针角度不能太大,回抽活塞的速度也不能过快。 对日龄很小的雏禽,术者用左手中指及无名指夹住左腿,暴露跖骨内侧静脉,方法同上。雏禽的血管细小,血流量很少,所以在抽血的过程中要特别缓慢。 2.3右侧颈静脉采血法 右侧颈静脉较左侧粗,故常采用右侧[4]。左手以食指和中指夹住家禽头部,并使头偏向左侧;常规消毒后,以拇指轻压颈椎根部以使静脉充血怒张。右手持注射器,挑破皮肤,倾斜30°左右角刺入静脉取血液。 2.4心脏采血法 心脏采血对心脏损伤较大,也易伤及其他脏器,造成内脏出血,影响正常生长,甚至会造成死亡,特别是雏鸡,常因针头刺破心脏和肝脏导致出血过多而死。心脏采血虽然较有难度,但是采血速度快、血量多、效率高,尤其适用于需要多量血液时采用。 (2)助手将禽仰卧保定,并使颈部及两腿伸展。术者用手摸到胸骨的前端,两侧锁骨融合成“V”字形的地方(鸭、鹅两锁骨的联合处较圆),局部常规处理。穿刺时,使该部皮肤紧张,避开嗉囊,针头垂直向下刺入,然后将角度略减小,继续斜向胸腔深部刺入,但要保持针尖指向胸腔中线,不宜偏斜(否则会刺伤肺组织),直至刺入心房,即可缓慢抽取血液。鸡心脏采血应在嗉囊空虚时进行,较为方便[5]。 3血清的制备与送检 3.1分离方法 3.2血清的保存及解冻 分离、密封好的血清,应冷冻或冷藏保存。一般情况下,在5d内测定的血清样品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存;样品待检时间超过1周的,需-15℃以下低温冷冻保存。血清从低温冰箱取出后,最好经4℃冰箱、室温、37℃水浴条件逐步均匀融解,血清应完全融解混匀后再用。解冻血清不宜反复冻融。反复冻融会使血清中的脂蛋白和纤维蛋白变性,导致出现絮状沉淀物[6]。 3.3血清的送检 采集的样品最好能在24h内及时送达实验室(需4℃左右冷藏)。如果24h内不能送检的,可把样品冷冻,并以此状态送检。送检过程中要防止震荡、倾倒、破碎,避免样品泄露。 参考文献: [2]董柏华,严春华.浅谈畜禽采血技术[J]. 中国动物检疫,2006, 23(4):40. [3]林开,严甦,严惠群. 家禽的采血技术及注意事项[J].畜牧兽医科技信息,2007(11):45. [4]陈俊杰a，邓俊良，陈 萍． 家禽的几种采血方法比较［Ｊ］． 中国家禽，２００５，２７（１１）：２１．