学号 02122035 姓名 陈阳 班级 生物工程22班
实习工厂 大庆油田化学剂及水处理质量检验中心 实习时间 XX年8月1日至XX年8月21日
考核成绩 优秀 指导老师 刘广民
生产实习是学校为锻炼本科生能力，让我们能更好的与社会相适应而组织的大三本科生的生产实践活动。接到要去生产实习的通知后，我很高兴，并积极联系，终于将实习地点定在大庆油田水处理与化学研究所。这是因为：首先，水化室的主要工作是油田水处理，化学剂量开发及检验，和我们的专业有一定的关系；其次，我们的课程当中并未涉及到有关水生细菌的详细知识，在这里进行生产实习可以扩展这方面的知识；我们在实验中所学习的操作方法可以得到应用基于以上几方面的原因，我选择在水处理所开始我的生产实习。
水处理与化学研究所隶属于大庆油田工程设计开发有限公司，原名大庆油田建设设计水处理及油田化学研究室（水化室）位于黑龙江省大庆市让胡路区油田设计院。多年来研制出原油破乳剂、油田清防蜡剂、油田防蜡剂、原油降粘剂、原油消泡剂、污水絮凝剂、防垢剂、缓蚀剂等12个系列40余种油田化学剂。
该所现有高中级职称的专业人才32人，博士2人，硕士8人。XX年通过了国家级计量认证。同年与哈尔滨工业大学强强联合，成立了哈尔滨工业大学环境科学与工程大庆研发中心。拥有研究仪器设备100多台（套），其中进口设备占60%实验室总面积为3000平方米。微生物实验室，可进行菌种培养驯化分离。拥有国内规模装备最为先进的三次采油实验室，可进行各种除油及过滤工艺和设备试验可自动合成的高压聚合反应实验室。
由于我的实习时间只有三个星期，故在刘老师的安排下对SRB做些认知性的实习，以下为我的主要实习内容
大致了解实验室自XX年开始启动的SRB抑制课题的一些工艺原理流程
硫酸盐还原菌（SRB）是导致大庆油田地面系统产生硫化物从而造成设备腐蚀、滤料污染等危害的根源;实验室立足于微生物生态抑制，改变以往追求杀灭SRB数量的目的，转而以抑制SRB活性为目的,是大庆油田系统控制SRB危害的新方法，可降低生产运行成本
本研究采用的折流板反应器有7个单元格，每个单元格长*宽*高=9.5cm*12cm*42cm,有效体积4.4L,单元格内装1/3高度的活性污泥.反应器上部为排气孔，排气孔的导气管伸到水封瓶液面以下，保持整个系统厌氧状态.
水箱中的水通过泵泵入反应器，以推流形式流过各单元格，并从反应器流出。
反应器的启动与运行
将含有大量的硫酸盐还原菌的厌氧污泥，接种到反应器中；
现阶段，反应器进水为配制的模拟水，在自来水中加入碳源（白糖）、硫酸钠、少量复合肥，用碳酸氢钠调节碱度；浓度：COD=1800mg/L,SO42-=600mg/L左右;进水流量46L/d, 每个单元格水力停留时间（HRT）=2.3hr
一、微生物镜下观察
G氏染色
步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。
涂片 与单染色法相同。
固定 与单染色法相同。
结晶紫染色 染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。
碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。
酒精脱色 用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止（大约半分钟），然后立即水洗，并吸干。
番红复染 染色3分钟左右，然后水洗并吸干。
镜检 在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌；菌体显红色的为革兰氏阴性菌。
SRB为革兰氏阴性菌（具体操作中由于番红变质几次实验结果均不理想）
二、厌氧型为生物的培养（SRB和DNB的富集）
1.SRB菌
采用
Hungate厌氧操作技术、绝迹稀释法（MPN）以及“滚管”培养对样本进行分离，多次纯化获得纯菌株SRB。具体方法：向改良后Starkey培养基（K2HPO4 0.5g，NH4CI 1.0g ，Na2SO4 10g ，CaCI2•2H2O 0.1g ，MgSO4•7H2O 2.0g，酵母膏 6.0g ，60%的乳酸钠溶液 6ml，蒸馏水1000 ml，pH=7.8）中加入0.2%的刃天青溶液，培养基煮沸后，加入L-半光盐酸盐0.5g，通入高纯氮气驱氧30min，121℃灭菌20min，固体培养基加入16%的琼脂糖。
单独配 3%的FeSO4•(NH4)2 SO4 厌氧
SRB菌株于液体培养基中37℃培养48h 后, 在Olympus COVER-018光学显微镜下革兰氏染色观察。
2.DNB菌
方法同SRB菌，PH值最好在7，
药品：
(NH4 ) 2SO4 3 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, M gSO4•7H2O 0.5g,
Ca (NO3 )2 0.01 g, FeSO4•7H2O 8.0 g, 蒸馏水1 000 mL
121℃灭菌15 m in。
恒温摇床培养箱振荡培养
由于此项操作开始时间较晚，至实习结束，菌落还未完成一个完整周期的培养。
三、水生细菌的计数
1.血球板计数法
取样：先清洗一个容量为100毫升的取样瓶或烧杯。取样前轻轻振荡试管搅拌，待分布均匀后，立即用注射器针管（无菌）取样，取样的量为1毫升。加蒸馏水100倍稀释。
样品放于计数板：放置前必须将血球计数板和盖玻片清洗干净、擦干，不能有油污染和杂质。将血球计数板平放在桌子上，盖好盖玻片；然后把样品瓶轻轻摇动几下，菌分布均匀，并立即用干净的微吸管取样品，迅速把微细吸管放到盖玻片的边缘处，轻压微细吸管的橡皮帽，使样品流入计数板内。注意控制样品流入量，不能过多，过多则流入到沟内；也不能过少，过少则计数时不准确（计数后的数量一般偏少），应充满画线方格及其周边部分。还应注意盖玻片下不能有气泡存在，否则会造成计数不准确。样品吸入血球计数板后，稍停1分钟，待细菌沉降在玻片表面上再在显微镜下进行计数。
计数：计数中央大格的4个角的中格，每个中格有25个小格，逐一计数，4个中格相加共计数100个小格。计数时应从计数框一角开始，在计数框边缘的标本应按"计上不计下、计左不计右"的原则，计数出细菌的总量后，按下式计算出每毫升菌液中的细菌数量：细菌数量＝100个小格的细菌数×4×10000×稀释倍数。
注意每个样品最少重复计数两次，然后取其平均值
#2 895=179(47,35,30,39,28)*5 1595=319(12,30,153,57,67)*5
(895+1595)/2*10000*100=1245*1000000
#8 815=163(50,50,20,32,11)*5 305=61(16,11,12,12,11)*5
(815+305)/2*10000*100=560*1000000
2.MPN法计数
1）称取样品1g，放入90ml无菌水中，振荡，让菌充分分散，然后按十倍稀释法将其制成10-1稀释液。
2）将26支装有培养液的试管（带胶塞，厌氧）按纵3横8的方阵排列于试管架上，第一纵列的3支试管上标以10-2，第二纵列的3支试管上标以10-3……第八纵列的3支管上际以10-9（即采用8个稀释度，3个重复），另外2支试管留作对照。
3） 用无菌注射器针管按无菌操作要求吸取10-1的土壤稀释液各lml放入编号10-2的3支试管中，再从10-2稀
释液各lml放入编号10-3的3支试管中，依次向后稀释。对照管不加稀释液。4）将所有试管置28℃培养8天后观察结果。
对照相关的MPN计数表查寻
MPN计数结果
2.0*100000 cfu/ml
一点建议：
在用电极法测定出水各项指标的时候，曾出现硝酸根一直无法检测或是与预期浓度相差很多的情况（进水里含有硝酸根），怀疑在进如反应器前某些微生物分解白糖时将硝酸钠作为氮源利用（所学有限），受师兄的启发提出新增加一个泵将硝酸钠和其它进水成分分开泵入，之后的测验效果还不错
三个星期的实习生活让我能把学到的知识得以应用，并且学到了一些在校园内无法深刻领悟的东西……一些感悟……
1.你可以伪装你的面孔你的心，但绝不可以忽略真诚的力量。
第一天去单位实习，我怀着惴惴不安的心情，之前听过很多关于实习生的传闻，说他们在单位要么被当成透明人，要么就净干些杂活，于是有点担心自己会和他们一样。
踏进实验室，只见几个陌生的脸孔。我微笑着和他们打招呼。从那天起，我养成了一个习惯，每天早上见到他们都要微笑的说声"早晨"或"早上好"，那是我心底真诚的问候。我总觉得，经常有一些细微的东西容易被我们忽略，比如轻轻的一声问候，但它却表达了对同事对朋友的关怀，也让他人感觉到被重视与被关心。
仅仅几天的时间，我就和同事们打成一片，我担心变成"透明人"的事情根本没有发生。
他们把我当朋友，也愿意把工作分配给我。
我想，应该是我的真诚，换取了同事的信任。
2.当你可以选择的时候，把主动权握在自己手中。
我想很多人和我一样，刚进实验室的时候，都做过类似刷片子洗瓶子搬蒸馏水的"杂活"。
或许同事们认为你是小字辈，要从小事做起，但有些时候，是因为他们心中没底，不知道你能做什么。
当你只有技术没有idea时，只能被派去做一些杂活；而当你有自己的idea能独当一面时，就会被委以挑战性的重任。因为，技术人人都可以学，而对于自己的idea你则拥有"专利权"因此，不要害怕将来从事的工作需要掌握新的技术，其实，技术不难学到手，难的是在工作中时时让自己的脑袋运转，激荡自己的独特的思想和想法。
同时做" 杂活"是工作的必需，有些东西不能选择，有些东西却可以选择。份内的工作当然要认真完成，但勇敢的"主动请缨"却能为你赢得更多的机会。只要勤问、勤学、勤做，就会有意想不到的收获。
我在实习中逐渐变得"勇敢"。虽然开始也会有顾忌，怕"主动出击"会招惹 "不知天高地厚"的蔑视。但事实告诉我，应该对自己有信心，应该有勇气去尝试。即便在尝试中失败，也能让自己成长，没有锻炼的机会，谈何积累和成长？而这一切，只能靠自己去争取。等待，只能让你在沉默中消亡；只有主动，才能为自己创造良机。
在我看来，不只实习的工作是这样，其它的行业也应该是这样。只有这样，你才能在工作中突出自己，显现自己的价值。
