关键词：高效液相色谱法（HPLC）;雪莲（Saussurea involucrata）;绿原酸;芦丁;木犀草素
Determing Chlorogenic Acid， Rutin and Luteolin in Saussurea Involucrate of Three Varieties with HPLC
（1.College of Life Science and Chemistry，Qinghai University for Nationalities， Xining 810007， China;
2.Key Laboratory of Chemical， Qinghai-Tibet Plateau Plants Resources，Xining 810007， China）
Key words：HPLC; Saussurea involucrata （Kar. et Kir.） Sch.-Bip.; chlorogenic acid; rutin; luteolin
雪莲（Saussurea involucrata）又名雪荷花，为菊科（Asteraceae）凤毛菊属（Saussurea）植物，珍稀名贵中药材，常见的有苞叶雪莲、水母雪莲、天山雪莲、唐古特雪莲等，主要分布在2 400 m以上的高原寒带地区的青海、新疆、甘肃、四川、西藏等地。雪莲性温、微苦，祛风除湿，通筋活血，暖宫散瘀效果显著。此外，对风湿性疾病具有特殊效果，还具有抗炎镇痛、止血消肿之功效，使用安全，无明显的不良反应[1-3]。药理研究显示芦丁、木犀草素和绿原酸为雪莲中的主要抗肿瘤抗癌有效成分[4-6]。对于芦丁、木犀草素和绿原酸在雪莲中的含量同时分析测定尚未见报道。为有效控制雪莲药材质量，本试验采用微波提取法对雪莲中芦丁、木犀草素和绿原酸进行提取，采用高效液相色谱法对芦丁、木犀草素和绿原酸的含量进行了测定，并比较了不同种雪莲药材3种物质的含量差异。该方法快速、简便、准确、重复性好，为雪莲药材的进一步研究和综合开发利用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
雪莲系2012年8月采自青海、新疆（经高原生物研究所胡凤祖副研究员鉴定）。
1.4 溶液的配制
2 结果与分析
2.1 系统适应性试验
分别吸取标准品溶液和供试品溶液，按“1.3”的色谱条件，分别进样10 μL，记录色谱图。结果表明在此色谱条件下，绿原酸、芦丁、木犀草素分离良好，分离度均大于1.5，且理论塔板数均不低于4 000，结果见图1至图4。
2.2 线性关系考察
精密吸取上述标准品储备液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，配成系列质量浓度的标准品溶液。取10 μL进样后记录峰面积，以质量浓度（μg/mL）为横坐标（X），以峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得到绿原酸、芦丁、木犀草素的回归方程。
绿原酸：Y=12 316X+99.5（r=0.999 9）
木犀草素：Y=22 277X+20.8（r=0.999 5）
2.3 稳定性试验
2.4 精密度试验
2.5 重复性试验
2.6 加样回收试验
2.6 样品测定
3 小结与讨论
雪莲中所含成分复杂，其理化性质相差较大，表现出较大的色谱行为差异。目前文献报道的多组分含量测定方法不甚理想，多有拖尾现象。考虑到绿原酸与芦丁2组分均具酸性，笔者通过调节流动相的pH，以抑制样品组分的解离，较好地改善了峰形[7]。同时，三者的极性差异较大，为了使各组分有较好的分离效果，采用梯度洗脱技术[8，9]。先后使用不同比例的甲醇、甲醇-磷酸、乙腈、乙腈-甲酸、乙腈-醋酸、乙腈-磷酸等，分离效果均不显著，分离度不达标，采用乙腈-0.8%磷酸水溶液梯度洗脱后，拖尾情况有较好改善，图谱特征性增强，目标峰的峰型和分离度均较好，故选择乙腈-0.8%磷酸水溶液为流动相[6]，用于梯度洗脱。
通过对3种雪莲样品中3种药效化合物的含量进行测定，结果表明，不同种雪莲有效成分含量有差异：木犀草素在苞叶雪莲中含量最高;绿原酸、芦丁在天山雪莲中含量最高。可见，品种基因影响了药材有效成分的积累，根据有效成分的含量确定药材的品种是非常必要的，为今后雪莲的开发应用提供了必要的信息。
参考文献：
[4] 张伟敏，张盛林，钟 耕.木犀草素的研究概况[J].中国食品添加剂，2005，6（2）：11-15.
[5] 陈绍华，王亚琴，罗立新.天然产物绿原酸的研究进展[J].食品科技，2008，4（2）：195-198.
[6] 陈 勇，李艳苓，李 立，等.HPLC法测定山绿茶不同炮制品种中绿原酸和芦丁的含量[J].广西科学院学报，2006，22（4）： 416-418.
[7] 董建辉，华 卡.高效液相色谱法同时测定天山雪莲中绿原酸和芦丁的含量[J].中南药学，2007，5（4）：333-335.
[8] 刘海芳，魏东伟，刘全军，等.太行菊不同器官中绿原酸和4种黄酮类物质含量研究[J].天然产物研究与开发，2013（5）：646-651，671.
[9] 刘尤岩，周文芳，王玉忠，等.高效液相色谱法分离测定雪莲细胞中的黄酮[J].药物分析杂志，2005，25（l）：40-43.