摘要：为了寻找有效提取杏鲍菇（Pleurotus eryngii Quel）菌丝胞外酶的方法，为杏鲍菇等食用菌胞外酶的活性研究和生长规律提供试验依据，研究通过pH 4.8的柠檬酸缓冲液、去离子水2种处理方式提取杏鲍菇菌丝胞外酶，并通过测定8种胞外酶酶活来对这2种方式进行比较分析。结果表明，2种提取方式对杏鲍菇菌丝胞外酶的酶活有差异，其中，酸性纤维素酶和果胶酶经酸处理酶活是水处理的2倍多;木聚糖酶和木质素降解相关酶类经酸处理的酶活也高于水处理，但淀粉酶和蛋白酶经酸处理酶活低于水处理。
关键词：杏鲍菇（Pleurotus eryngii）;胞外酶;酸处理;水处理;比较分析
Comparative Analyses of Two Methods of Extracting Extracellular Enzymes
from Pleurotus eryngii
LUO Wei，XIE Chun-liang，YAN Li，ZHU Zuo-hua，LI Zhi-min，HU Zhen-xiu，PENG Yuan-de
Abstract： In order to find effective methods of extracting extracellular enzymes from Pleurotus eryngii mycelium and provide reliable experimental basis for studying activity of extracellular enzyme and regulating growth of Pleurotus eryngii or other edible fungi， two approaches including acid（citrate buffer at pH 4.8） and distilled water process were used to extract extracellular enzymes from Pleurotus eryngii mycelium. Activities of eight extracellular enzymes were determined to compare the two methods. The results showed that the two extraction methods had significant differences in activity of extracellular enzyme. The activity of Pectinase and cellulase extracted with acid was twice as that of water. The activities of xylanase， pectinase and lignin related enzymes after acid treatment were higher than that of water. The activities of amylase and protease in acid extraction was lower than that in water extraction.
Key words： Pleurotus eryngii Qual; extracellular enzymes; acid extraction; water extraction; comparative analysis
1 材料与方法
1.1 供试菌株
羧甲基纤维素钠、木聚糖、果胶和半乳糖醛酸为Sigma公司产品，柠檬酸、无水葡萄糖、木糖、乙酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、邻联甲苯胺、纤维二糖、丙二酸，丙二酸钠、ABTS、黎芦醇、果胶、硫酸锰、牛血清蛋白、PBS缓冲液、考马斯亮蓝染液、酒石酸、双氧水、酒石酸甲钠、3，5-二硝基水杨酸、可溶性淀粉为国产分析纯。
1.3 试验方法
1.3.3 酸性纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶酶活的测定
1）酸性纤维素酶酶活的测定。相关溶液和试剂的配置参照Mandels等[10]的方法，取3支试管各加入0.5 mL酸性CMC底物，与待测酶液一起在50 ℃水浴中预热5 min。在第一、二支试管中各加入0.5 mL待测酶液，50 ℃水浴中反应15 min。在3支试管中各加入3 mL的DNS试剂，然后在第三支试管中加入0.5 mL的待测酶液。摇匀3支试管后，在沸水浴中煮5 min。水浴冷却至室温后，以第三支试管为对照在540 nm下测第一、二支试管的吸光度。酶活（IU/mL）=（葡萄糖等量值/180/15/0.5）×稀释倍数。
3）木聚糖酶酶活的测定。相关溶液和试剂的配置参照Shamala等[12]的方法。采用DNS法，取3支试管各加入0.5 mL中性木聚糖底物，与待测酶液一起在50 ℃水浴中预热5 min。在第一、二支试管中各加入0.5 mL待测酶液，50 ℃水浴中反应15 min。在三支试管中各加入3 mL的DNS试剂，然后在第三支试管中加入0.5 mL的待测酶液。摇匀3支试管后，在沸水浴中煮10 min。水浴冷却至室温后，将显色液（包括空白）以4 000 r/min离心5 min。取上清液以第三支试管为对照在540 nm下测第一、二支试管的吸光度。酶活（IU/mL）=（葡萄糖等量值/150/15/0.5）×稀释倍数。
1.3.4 淀粉酶、蛋白酶酶活的测定
1）淀粉酶酶活的测定。相关溶液和试剂配置参照管道平[5]的方法，在3支试管中加入1%可溶性淀粉溶液1 mL，加入pH 4.8、0.1 mol/L柠檬酸缓冲溶液4 mL，去离子水1 mL，在第一、第二支试管中加入酶液l mL，40 ℃水浴中保温30 min。在3支试管中各加入3 mL的DNS，然后在第三支试管加入1 mL的酶液。摇匀3支试管在沸水浴中煮5 min。水浴冷却至室温后，以第三支试管为对照在540 nm下测第一、二支试管的吸光度。酶活单位定义为每小时酶促生成l mg葡萄糖的酶量。