番红花，为鸢尾科番红花属植物，也是一种常见香料。具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神之功效，是传统的滋补上品。番红花多糖是番红花的活性成分。同传统的水浸提法提取多糖相比，超声波辅助提取具有有效成分提取率高，提取时间短，环保等优势。因此，对番红花多糖的响应面提取工艺进行优化，并对其耐缺氧能力进行深入研究，以期为番红花的综合利用提供理论基础。
1 材料及方法
1.1 原料与试剂
番红花，市售;葡萄糖、磷酸盐缓冲液、钠石灰、亚硝酸钠，实验室提供。昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18~24 g。
1.2 仪器与设备
BS110S 分析天平：东莞市东盛仪器有限公司;SpectrumLab54 紫外分光光度计：东莞市东盛仪器有限公司;秒表：惠州立升仪器有限公司;GZX-9070MBE 电热恒温鼓风干燥箱：惠州立升仪器有限公司;RE52-AA 旋转蒸发仪：东莞市东盛仪器有限公司;JP300G 超声波提取设备：济宁金百特公司。
1.3 试验方法
1.3.1 番红花多糖提取工艺流程
番红花清洗去杂烘干粉粹按液料比值加入水水超声波提取离心滤液浓缩至原体积的1/5乙醇沉淀滤液离心干燥多糖粗提物。
1.3.2 番红花多糖测定
番红花多糖的测定采用蒽酮-硫酸法。标准曲线的回归方程为：Y=7.130 6X+0.028 3，R2=0.999 1。X，表示葡萄糖溶液质量浓度，mg/mL;Y，表示吸光度OD值。
1.3.3 番红花多糖提取工艺条件优化试验
选取显著因素的最优试验范围，以番红花多糖提取率为优化指标，对番红花多糖提取工艺条件进行响应面分析，从而优化其最佳工艺。
2 结果与分析
2.1 番红花多糖提取条件的优化试验
2.1.1 液料比值对番红花多糖提取效果的影响
设定超声波功率为240 W，超声波时间为32 min，乙醇质量分数为85%，分别在液料比值为4，8，12，16，20和24(mL/g)6个梯度下，按方法1.3.1提取番红花多糖。由图1可以看出，液料比值应控制在16(mL/g)左右较为适宜。
2.1.2 乙醇质量分数对番红花多糖提取效果的影响
设定超声波功率为240 W，超声波时间为32min，液料比值为16(mL/g)，分别在乙醇质量分数为70%，75%，80%，85%，90%和95% 6个梯度下，按方法1.3.1提取番红花多糖。
2.1.3 超声波功率对番红花多糖提取效果的影响
设定乙醇质量分数为85%，超声波时间为32min，液料比值为16(mL/g)，分别在超声波功率为120，160，200，240，280和320 W 6个梯度下，按方法1.3.1提取番红花多糖。由图3可以看出，超声波功率应控制在240 W左右较为适宜。
根据番红花多糖提取试验结果和回归方程各项的方差分析，由响应面分析法优化出番红花多糖提取最佳工艺条件，即番红花多糖提取最佳工艺条件为超声波功率为253.5 W，超声波时间为31.9 min，乙醇质量分数为83.9%，液料比值为16.4(mL/g)。
2.2 番红花多糖耐缺氧能力试验
2.2.1 番红花多糖对小鼠常压耐缺氧存活时间的影响
从表4可以看出，常压缺氧条件下，番红花多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠存活时间显著长于对照组。与对照组比较，番红花多糖番红花多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠存活时间分别延长了7.79%，10.9%和16.66%。
2.2.2 番红花多糖对小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间的影响
亚硝酸钠所致缺氧条件下，番红花多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠存活时间显著长于对照组。与对照组比较，番红花多糖番红花多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠存活时间分别延长了20.71%，26.31%和37.06%。
3 结论
番红花多糖提取最佳工艺条件为超声波功率为253.5 W，超声波时间为31.9 min，乙醇质量分数为83.9%，液料比值为16.4(mL/g)。
番红花多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组与对照组比较，在常压缺氧条件下，小鼠存活时间分别延长了7.79%，10.9%和16.66%;在亚硝酸钠所致缺氧条件下，小鼠存活时间分别延长了20.71%，26.31%和37.06%。表明番红花多糖具有耐缺氧能力。
