制备方法对胎盘保健品功效会产生直接影响,胚盘组织经提取制成胶囊或口服液,是羊胎盘保健品制备发展的重要阶段,其功效为多种活性物质的协同作用,即取决于成品中活性物质的含量,对这部分物质进行有效保护,可确保胚盘保健品的功效,现通过实验对羊胎盘保健品的制备及主要功效进行探究。
1 资料与方法
1.1 实验资料
选用新鲜健康山羊胎盘,试验动物包括500只小白鼠,2只雄性麻黄鸡,1只雌性小尾寒羊;药品及试剂有磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、环磷酰胺、丙酮、丙二醛试剂盒、血尿素氮试剂盒等,其他试剂均为分析纯;试验仪器有捣碎匀浆机、离心机、精密电子天平、生物素显微镜、二氧化碳培养箱、分光光度计、超声波清洗器等。
1.2 试验方法
1.2.1 制备
胚盘制品制备前先完成ACD抗凝血溶液、PBS溶液、Giemsa原液、鸡血红细胞悬液和羊血红细胞悬液的制备,然后制备胎盘提取液,具体流程为:①用生理盐水冲洗山羊胎盘,去除筋膜和脐带,然后浸泡、甩水、剪碎、沥干,再放入捣碎匀浆机中匀浆,冻融3次后离心沉淀。②对上清液进行过滤,沉淀部分采用胰蛋白及蛋白酶酶解;对酶解后的上清液进行过滤,沉淀部分加入乙醇浸泡,过滤上清液后去除乙醇;然后将水溶性提取液和脂溶性提取液混合在一起,获得胎盘提取物。③沥干后,根据营养学会推荐用量,按配方一、二中的比例添加填充物并混匀,装入胶囊并称重,配方总重约2g,胶囊净重约500mg,最终获得产品GPHPⅠ和GPHPⅡ。
1.2.2 试验
①毒性试验。取50只小白鼠,雌雄各半,对其进行分组,每组10只,剂量分别对人推荐剂量的1倍、5倍、10倍、50倍和100倍,每日0.1ml,连续灌胃两周,观察这期间小白鼠的采食饮水状况、精神状态和皮毛光滑度,处死检查其是否有中毒症状;另取取50只小白鼠,雌雄各半,对其进行分组,每组10只,剂量分别对人推荐剂量的1倍、5倍、10倍,每日0.1ml,连续灌胃1个月,观察这期间小白鼠的采食饮水状况、精神状态和皮毛光滑度,处死检查其功能异常情况及形态学变化。②免疫调节作用。取40只小白鼠,雌雄各半,对其进行分组,每组10只,分别灌生理盐水及对人推荐剂量的1倍、5倍、10倍,每日0.1ml,连续灌胃1个月,处死取出免疫器官,根据胸腺指数=胸腺重/体重和脾脏指数=脾脏重/体重公式计算免疫器官指数;利用配置好的溶液,分别测定小白鼠的迟发型变态反应、血清溶血素以及腹腔巨噬细胞吞噬能力和碳廓清能力。血清凝集程度分为5级,抗体积数越大表明血清中抗体水平越高;采用吞噬的鸡红细胞数与巨噬细胞数表示吞噬指数,廓清指数为。③抗疲劳和延缓衰老作用。分组与免疫器官指数测定试验相同,将小白鼠放置游泳箱内进行负重游泳试验,并测定其血中尿素氮、红细胞SOD活性和血清MDA含量。
1.3 数据处理
采用SPSS13.0软件包对所获数据进行统计分析,以标准差表示,采用t检验,P0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
灌服不同剂量GPHPⅠ和GPHPⅡ的小白鼠,均无死亡及其他异常现象,处理后检查各器官均未出现药物导致的病理变化。免疫器官指数测定结果显示,GPHPⅠ试验中,各剂量组小白鼠胸腺指数比较差异并不显著(P0.05),与低、中剂量组相比,高剂量组脾脏指数变化明显(PGPHPⅡ试验与GPHPⅠ试验结果基本一致。负重游泳及血清尿素氮含量测定结果显示,GPHPⅠ试验中,各剂量组小白鼠游泳时间比较差异并不显著(P0.05),与对照组相比,中、高剂量组血清尿素氮含量变化明显(PGPHPⅡ试验中,与对照组相比,高剂量组小白鼠游泳时间达到显著性(P0.05),中、高剂量组血清尿素氮含量达到极显著性(P0.01)。
3 讨论
胚盘指的是羊膜囊底部外胚层与卵黄囊顶部内胚层紧密相贴的盘形区域,是妊娠期间母体与胎儿进行物质交换的纽带,能够分泌出酶类、激素,其中含有多有蛋白质、生长因子、细胞因子及小分子活性物质等,具有极为重要的生理功能[2]。大量临床实验证明,胚盘能够起到强身健体的作用,能够增加免疫器官指数,因此广泛应用于肿瘤、呼吸系统等引发机体免疫力降低上,但主要以复方的形式存在,以羊胚盘为原料的保健制品正处于开发阶段,潜在着巨大的商业价值,对羊胎盘保健品的制备及主要功效进行分析和探讨,有着重要的现实意义[3]。本次实验证实,羊胎盘保健品具有增强人体免疫力以及抗疲劳、延缓衰老的作用,且无毒副作用,值得开发推广。
