摘 要 采集市场上几种常见的有籽葡萄及无籽葡萄品种样本，采用有机溶剂提取法进行原花青素的提取，利用铁盐催化比色法测定葡萄籽及葡萄皮中原花青素的含量。结果显示在有籽葡萄中，黑加仑葡萄籽及葡萄皮原花青素含量是所有葡萄中最高的，分e为葡萄籽中232.1mg/g，葡萄皮中125.5mg/g；在无籽葡萄中，葡萄皮原花青素含量最高的品种为黑提，为51.9mg/g。本研究结果为原花青素食品和保健品的开发提供了实验依据，同时也对帮助人们选择食用高水平原花青素含量的葡萄具有指导意义。
关键词 原花青素 铁盐催化法 葡萄籽 葡萄皮
中图分类号：R151 文献标识码：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdks.2017.12.077
原花青素（Proanthocyanidins，简称 PC）是自然界广泛存在的多酚类化合物的总称。这类化合物由不同数目的黄烷醇聚合而成，在无机酸存在和加热处理下能产生红色的花青素。原花青素具有多种药理活性，如抗氧化、清除自由基、护肝解毒、抗菌及抗癌等功能。[1]目前，原花青素已广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。[2]
原花青素一般存在于果皮及植物的木实部，多见于水果，如葡萄、山楂、番荔枝、野草莓、樱桃、扁桃和椰子等。其中以葡萄籽中的含量最为丰富，本研究采集了市场上几种常见品种的葡萄，通过测定葡萄籽和葡萄皮中原花青素的含量，为富含原花青素食品和保健品的开发提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
市场上常见的7个葡萄品种，分别为：有籽红提、冰糖葡萄、巨峰、黑加仑、玫瑰香、无籽红提、黑提，各品种葡萄的成熟度均匀一致。
1.2 试剂
甲醇，盐酸，原花青素纯品，硫酸铁铵，正丁醇。
1.3 仪器与设备
分析天平，全波长酶标仪，干燥箱，60目筛，离心机，旋涡震荡器。
1.4 实验方法
1.4.1 葡萄样品的处理
将葡萄籽及葡萄皮分别收集，洗净葡萄籽及葡萄籽表面的果肉，将洗净的葡萄籽及葡萄皮置于干燥箱中至完全干透，然后研磨过筛，将过筛后的样品置于干燥处保存。
1.4.2 原花青素标准溶液的制备[3]
精密称取原花青素标准品10mg，用甲醇溶解定容至10ml，制成1mg/ml原花青素标准溶液。
1.4.3 分析试剂的制备[4]
精密称取硫酸铁铵2.00g，加2mol/L盐酸溶液溶解并稀释至100ml，摇匀，即为2.0%硫酸铁铵溶液。于100ml容量瓶中加入约2/3的正丁醇，精密加入2mol/L盐酸5.0mL，用正丁醇定容至刻度，即为5%HCl/正丁醇溶液。
1.4.4 标准曲线的建立[5]
分别精密吸取原花青素标准溶液40ul、100ul、200ul、400ul、600ul，用甲醇稀释至4000ul（浓度即为0.01mg/ml、0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.15mg/ml）。分别精密吸取上述溶液400ul，加入2.4ml的5%盐酸/正丁醇溶液，80ul的2.0%硫酸铁铵溶液于具塞试管中，将试管瓶口密塞，置沸水中水浴加热40min，冰浴冷却15min；用400ul甲醇，2.4ml的5%盐酸/正丁醇溶液，80ul的2.0%硫酸铁铵溶液做空白组。在波长400～800nm范围内扫描，分析最大吸收波长。 将原花青素标准溶液每浓度设3个平行孔，并分别设置空白孔以调零。用酶标仪测定，以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.4.5 样品中原花青素含量的测定
准确称取样品粉末0.2g，加入4ml甲醇，用旋涡震荡器20min，3000r/min离心20min，取上清液1ml于10ml容量瓶中定容，方法同上，测定。[6]将数据代入标准曲线可计算得样品中原花青素浓度。
2 结果
在全波长酶标仪400～800nm波长范围内扫描，结果显示原花青素标准液最大吸收波长。为550nm，见图1。
以原花青素浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线如图2所示，求得吸光度与标准品质量浓度关系的线性回归方程为：y = 1.8175x - 0.0009，相关系数为R2 = 0.9983，说明对照品在0.010～0.150 mg/mL范围内，y与浓度x呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析。
测定样品原花青素吸光值后，代入标准曲线并根据以下公式计算样品中原花青素含量如图3所示。
公式：原花青素含量D（mg/g）：D=（Vxn）/W
式中V为试剂定容体积（mL），C为试剂中原花青素浓度（mg/ml），n为稀释倍数，W槭约林亓浚g）。
从图3中可以看出，在所有葡萄品种中黑加仑的葡萄籽原花青素含量最高，为232.1mg/g，其次是有籽红提的籽，为161.4mg/g；在所有葡萄品种中黑加仑的葡萄皮原花青素含量也最高，为125.5mg/g，其次是黑提皮，为51.9mg/g。
3 讨论与小结
花青素作为一种具有保健功效的天然色素越来越引起人们的关注，但目前国内市场上还没有花青素纯品。[7]发掘高花青素水平的植物可为提取高纯度的花青素以及对花色苷类色素的深入研究与开发提供实验依据，并且有助于应用和推广。本研究实验结果显示葡萄籽和葡萄皮中的原花青素含量丰富，特别是黑加仑葡萄，其花青素含量显著高于其他品种的葡萄，是值得推荐的健康食品，也为后续开发原花青素类的保健品提供了实验依据。
参考文献
[1] 张星和，杨晓娜.原花青素提取方法进展[J].南方农业，2014.8（30）：154-155.
[2] 侯锐，陈琦，王利，等.花青素及其生物活性的研究进展[J].现代生物医学进展，2015.15（28）：5590-5593.
[3] 钟益宁，柳欢，吴诗云，等.肉桂枝叶非挥发部分原花青素含量测定的比较研究[J].中国调味品，2016.41（8）：110-114.
[4] 陈安平，黄勇军，汪胜峰.市售蓝莓类产品的原花青素含量测定[J].食品研究与开发，2016.37（1）：170-173.
[5] 吴艳艳，侯冬岩，回瑞华.铁观音茶和茶茎原花青素含量的测定[J]鞍山师范学院学报，.2012.14（2）：30-33.
[6] 廖素凤，陈剑雄，黄志伟，等.响应曲面分析法优化葡萄籽原花青素提取工艺的研究[J].热带作物学报，2011.32（3）：554-559.
[7] 赵美丽，屈文峰，边风根.蓝莓原花青素的提取与检测方法[J].江西化学，2014：123-125.
