1 开机
（1）打开电脑，Windows完全启动后。
（2）打开分光光度计电源前确认样品室内无挡光物。
（3）点击电脑桌面上的UVWIN5软件后，显示已联接上光度计，仪器并进行自检初始化，整个过程需要4 min左右，在相应的各项后显示“确认”，则通过自检，进入工作界面，仪器必须经过15～30 min的预热，稳定后再开始测量。必须先打开光度计电源，再点击UVWIN5软件，否则无法联接。
（4）自检完毕，出现层叠窗口或垂直排列窗口或水平排列窗口。
2 说明
由于该实验室一般只用到定量测量，所以在此省略光度测量、光谱扫描、时间扫描等的操作。
3 定量测量
（1）在对话框上点击定量测量，在文件下面点击打开参数，点击参数子画框下的参数设置，点击参数设置下面的（氨氮、总氮、总磷参数）设置具体参数。
（2）初次的参数设置是一个细致的过程，点击测量，显示定量测量参数设置。
②点击M校正曲线，曲线方程：c=f（Abs）；方程次数（O）：一次；c=k1*（Abs）+k0；输入数据类型点中“浓度”，无需点中“体积”；浓度单位：mg/L；曲线评估：无；“扣除空白”及“零点插入”不能打勾；校正方法：点中“系数法”，无需点中“浓度法”，填上K0和K1。
③点击仪器，显示设置仪器参数：灯状态下氘灯及钨灯皆显红色；参数设置下的光谱带宽（S）：2.0 nm；响应时间（R）：0.2秒；换灯波长：TN361.00 nm，TP及NH3-N3 59.90 nm。
④点击附件，显示设置附件参数，附件（T）下的“固定样品池/八联池/五联池/流动池/积分球”中选中“五联池”，“复位（R）”无需点；空白样品名（B）：填写成“空白”；设置（S）：位置默认序号1，序号下显示1～5，类型下全部显示“样品”，“样品名”默认为（无），可以输入名称；点击类型下面的样品后的倒三角形，显示“X未使用/样品/空白”。
⑤点击M质量控制，在“启用质量控制功能（E）”的左边打勾，质量控制（Q）下“浓度/Abs/SD/RSD”中SD和RSD打勾，“全选、反选、清除”可变换；功能（E）；限定上限值（H）、超上限处理（I）、超上限标记（F）、下限值（L）、超下线处理（T）、超下线标记（G）全部无需填写。
⑥点击M简单计算，在“启用简单计算（C）”的左边打勾；鼠标移动在“计算公式（E）”中，下面显示“符号”，由下面选择数字及符号；计算单位（U）不用填，再点击添加（A）；还有功能键“修改（M）、删除（V）、清除（L）”；显示（S）：点击倒三角可选择“公式”或“标题”，选中什么主窗口显示什么，一般来说公式直观。
⑦完成以上设置，单击“确定”键退出，保存参数。
（4）以比色皿的宽度为准，设置样品池小插片，氨氮比色皿是20.0 mm，放第二格，总氮比色皿是10.0 mm，放第一格，而且必须是石英比色皿，总磷比色皿是30.0 mm，放第三格。
（5）点击“波长定位”同一列的“校零”。
（6）当波长定位入NH3=420nm，入TN= 220nm和入TN=275nm，入=700nm的Abs显示为零时。
（7）以零样即空白样为参比，倒入五个比色皿的样品池中。
（8）再一次点击“校零”。
（9）点击左下角“ABC√”进行空白池校正。
（10）此时波长定位同一列的Abs为零。
（11）把待测样品倒入样品池中，点击开始，可测出Abs和浓度，此时比色皿的顺序和方向不能改变。
（12）NH3-N由于取样的体积不一样，结果需由浓度分别除以体积而得到。
①点击工具栏的。
②点击简单计算，再点击启用简单计算。
③输入公式，TN为CONC/2，TP为CONC/5，即浓度/取样体积。
④点击添加。
⑤点击确认。
⑥即可在主窗口的最后一列按照四舍五入法得到结果。
（14）实验数据结果保存时先点击工具栏的保存。
（15）点击保存下面的数据。
（16）输入NH3-N、TN、TP的监测日期，保存当天数据，定量数据格式为“.qud”。
（17）点击退出UVWIN5软件。
（18）关掉光度计电源。
（19）退出UVWIN5软件。
（20）关掉电脑电源。
4 标线的制作
（1）开机与测样相同。
（2）点击打开原参数设置。
（3）设置小插片，保留第一个样品池，点击其余4个点击右键的“X未使用”。
（4）点击波长定位同一列的校零。
（5）点击 显示定量测定参数设置，
（6）点击校正曲线下面的曲线评估下的R2，再点中校正方法下的“浓度法”，再点击确定。
（7）以零样为空白，点击“ABC√”进行空白池校正。
（8）在标准样品表格上，一次一个样依次从低浓度到高浓度得到吸光度。
（9）测定完后输入对应的浓度。
（11）点击 。
（12）点击校正曲线，点击系数法。
（13）输入K0和K1 。
（14）点击确定。
（15）点击文件下的保存参数。
（16）在参数设置下点击氨氮或总氮或总磷，输入文件名即可。
（17）点击保存。
（18）退出UVWIN5。
（19）关光度计电源。
（20）关电脑。
5 测量标准样品时，未知样品的测定
将鼠标移动到未知样品测量表格，放入待测未知样品，将鼠标移动并点中到未知样品测量窗口，单击“开始”，即可测出样品浓度。
6 维护和保养
分光光度计是精密光学仪器，正确安装、使用和保养对保持仪器良好的性能和保证测试的准确度有重要作用。
6.1 对仪器工作条件的要求
（1）仪器应放在干燥的实验室内，确保温度为15 ℃～35 ℃，相对湿度低于80%。
（2）仪器应放置在坚固平稳的减震台上，应避免强烈的或持续的震动。
（3）室内照明不能太强，且应避免日光的直射。
（4）电扇不能直接向仪器吹风，以防止氘灯和钨灯因发光失去稳定而影响仪器的正常使用。
（5）应该远离高强度的电场、磁场、及发射高频波的电器设备。
（6）最好配制交流稳压器，保证供给仪器的电压220±22 V，频率50Hz±1Hz，单项交流电，功率不小于500 VA，室内应安装地线以保证仪器良好接地。
（7）避免在有腐蚀性气体如硫化氢等的场所使用。
6.2 维护和保养
（1）对于强腐蚀、易挥发的待测试样，测定时比色皿必须加盖。
（2）日常使用后应检查样品室是否有溶液溢出，应时常擦拭样品室，若比色室中有水样溅入，需立即用软棉纱布或滤纸擦拭干净，否则废液会腐蚀部件和光路系统。
（3）仪器外表面需保持清洁，清理仪器的外表面时，请勿使用有机溶剂如乙醇、乙醚等，应采用清水擦拭外表面；且应每月至少一次进行清洁，若长时间不使用请加防尘罩。使用结束，应盖好防尘罩，若室内潮湿，可在样品室及光源室内放置硅胶袋，但开机前一定要取出。
（4）每次使用比色管和比色皿过后，注意清洁及存放，方便下次取用。
（5）应对仪器性能定期进行指标检测，检测周期为1年，使用现场发现问题应立即与厂家或销售部门联系，尽快解决。
7 结语
紫外可见分光光度计是实验室最常用的精密仪器，与电脑联机，需要预热，它可以进行光度测量、光谱扫描、时间扫描等的操作，在此只描述定量测量的操作。在定量测量的参数设置时，它的最初设置是一个细致且必要的过程。最初设置完毕，进行测量比较简单，再有制作标线需要准确操作。光度计的安装环境、使用和保养也至关重要。以后还可以深入了解紫外可见分光光度计的系统构成、使用原理、测定过程偏离的影响因素等。
