摘要：为控制桑葚制剂质量的稳定性，采用分光光度法对不同产地桑葚药材中总黄酮含量进行分析比较。以芦丁为对照品，亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，测定波长为501 nm，芦丁浓度在0.008 18～0.049 06 mg/mL范围内吸收值与浓度具有良好的线性关系（r=0.999 7），平均加样回收率分别为103.30%、104.03%和105.83%，RSD值为2.65%、2.86%和2.27%（n=9）。该分析方法简单快速、准确可靠，可用于桑葚中总黄酮成分含量的测定。分别测定了8个不同产地药材中的总黄酮含量，含量范围为0.653～2.074 mg/g。结果表明，不同产地桑葚中总黄酮含量差异较大，说明环境综合机制对桑葚中总黄酮含量有明显影响。
关键词：桑葚；芦丁；总黄酮；产地
中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5526-02
桑葚是荨麻目桑科植物桑树（Morus alba L.）的成熟果穗，含有丰富的营养物质，既具有食用价值又可作为药材使用，为卫生部首批药食两用的农产品之一，具有良好的开发和应用前景[1-4]。中国桑葚资源丰富，共有15个种4个变种3 000多个种质资源，在全国各省市均有桑葚的分布[5]。
总黄酮为桑葚及其相关制剂的主要药效成分，在桑葚药品的开发过程中，总黄酮为其制剂的主要质量控制标准。但另一方面，在制剂生产过程中，研究人员发现不同产地的桑葚中总黄酮差异较大，导致其制剂质量不稳定。为控制药品质量，通过分析比较不同产地桑葚中的总黄酮含量，可为开发其相关产品提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
桑葚干果（分别购自山东乐陵、安徽合肥、新疆吐鲁番、江西樟树、四川南充、广东揭阳、河北安国、陕西洋县），经鉴定为桑科植物桑葚成熟果实，留样凭证存放于本校药学院中药鉴定实验室。
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100 080-200 707，以UV法测定含量为92.5%）；水为去离子水；其余试剂均为分析纯试剂。
1.2 仪器
UV-2550型紫外可见分光光度计（日本岛津制作所），XS205型电子分析天平（梅特勒-托利多国际股份有限公司）；KQ300-DE型双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；JC101型电热鼓风干燥箱（南通嘉程仪器有限公司）。
1.3 方法
1.3.1 样品溶液的制备 取芦丁对照品22.10 mg于100 mL容量瓶中，加70%（V/V，下同）乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得0.221 0 mg/mL对照品溶液；将桑葚样品干燥至恒重，取约5g干燥样品于具塞三角瓶中，加入70%乙醇100 mL，超声1 h，过滤，重复2次，合并滤液即得样品溶液。
1.3.2 测定波长的选择 经紫外-可见光区扫描，芦丁对照品溶液的最大吸收波长为501 nm，故本研究选择501 nm为测定波长。
1.3.3 标准曲线的制作 分别量取2.0～12.0 mL不同体积的对照品溶液于50 mL容量瓶中，加水至12 mL，加5%亚硝酸钠溶液2 mL，混匀，放置6 min。加10%（m/V）硝酸铝溶液2 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液20 mL。再加水至刻度，摇匀，放置15 min；以相应试剂为空白参比，按照紫外-可见光分光光度法[6]，测定501 nm处吸光度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2 结果与分析
2.1 标准曲线回归方程
按照“1.3.3”得回归方程为A=11.584 0C-0.006 3，r=0.999 7，线性范围0.008 18～0.049 06 mg/mL。
2.2 方法学考察结果
取同一份对照品溶液，每隔一定时间测定501 nm处吸光值。结果表明在显色后30 min内溶液吸收值保持稳定；取同一供试品溶液（产地：山东乐陵），连续测定6次，其吸收值的RSD为0.55%，说明精密度良好；取同一桑葚样品（产地：山东乐陵），平行制备6份供试品溶液，并按测定项下方法测定，其吸收值RSD为1.92%，表明方法重复性良好。
采用加样回收法，取已知含量的桑葚样品（产地：山东乐陵），共9份，按80%，100%，120%分别加入芦丁对照品，各3份，按上述方法测定3种浓度的平均回收率及RSD值，如表1所示。
2.3 样品测定
精密量取供试品溶液12.0 mL，定容至50 mL（同时设去离子水为空白对照），同上法测定吸收度，根据标准曲线计算各样品中总黄酮（以芦丁计）的含量，结果见表2。
3 讨论
总黄酮是评价桑葚药材质量的重要指标，以芦丁为对照品的比色法是测定总黄酮含量的经典方法[7]。本文建立了桑葚药材中总黄酮含量测定的方法，方法简便、准确、稳定性好，该方法可用于桑葚及其相关制剂中总黄酮含量的分析测定。根据文献方法[8，9]，比较了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶剂，结果表明，以70%乙醇提取黄酮总含量较高，干扰杂质少，故确定用70%乙醇作为提取溶剂。中药材中有效成分的含量受地质、环境、气候的影响。本试验结果表明，产地不同的桑葚中总黄酮具有较大差异，即在桑葚制剂的制备过程中，有必要对所不同产地、不同批次、不同采收季节的桑葚原药材中总黄酮的含量进行监测，防止因药材中总黄酮含量的变化导致桑葚制剂中总黄酮含量的大幅波动，以保证制剂质量的稳定性。
参考文献：
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