摘要：以黑玫瑰石竹（Dianthus linn）茎段为外植体，MS培养基为基本培养基，研究了6-BA与NAA对黑玫瑰石竹试管苗不定芽分化的影响。结果表明，采用MS+1.0 mg/L 6-BA和0.2 mg/L NAA培养基对芽分化及生长效果较好。
关键词：黑玫瑰石竹（Dianthus linn）；组织培养；6-BA；NAA
中图分类号：S681.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）16-4063-02
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.060
Effects of 6-BA and NAA on Dianthus linn in vitro Culture
CHEN Xiao-qiang， YU Ze-tao， SUN Ning， XIN Nan， DENG Lin-xia
（College of Agronomy & Resources and Environment， Tianjin Agricultural University， Tianjin 300384， China）
Abstract： The stem section of Dianthus linn were used as explants， MS was basic medium， the effects of 6-BA and NAA on Dianthus linn bud differentiation were discussed.The results showed that the medium with MS +20 g/L sucrose+1.0 mg/L 6-BA and 0.2 mg/L NAA was better for bud differentiation and bud growth.
Key words： Dianthus linn； plant tissue culture； hormones；6-BA；NAA
黑玫瑰石竹（Dianthus linn）系多年生宿根草本植物，地生、茎直立，花朵为紫色，聚伞花絮且花期长，能够雅俗共赏，市场需求量很大[1]。常规的扦插繁殖成活率低，无法满足市场的需求，而且长期的营养生殖使病虫害加重，直接影响其商品价值。通过组织培养技术繁育黑玫瑰石竹，有快速、复壮、脱毒的效果，可大大地提高其产量和质量，同时也可以培育优良的新品种[2]。目前，国内对黑玫瑰石竹组织培养方面的研究较少，主要集中在玻璃化问题的解决，而关于激素对黑玫瑰石竹组织培养的影响报道更少[3]。因此，本试验研究了不同外源激素对黑玫瑰石竹组织培养的影响，旨在为黑玫瑰石竹乃至石竹类植物快速繁殖及大规模生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料为黑玫瑰石竹，取自天津农学院农学与资源环境学院植物细胞工程研究中心，选用的是无病害、花型好、花色纯正、品种优良、生长健壮的植株。
1.2 培养条件
日光灯为光源，光照时间14～16 h、光照度1 500～2 000 lx，温度25±2 ℃，相对湿度70%～80%。
1.3 试验方法
1.3.1 外植体的采集与消毒 选取品种优良、花色纯正、花型好、无病虫害、生长健壮的植株基部采取侧芽，逐层剥去叶片，留顶部未展开的2～3对叶，切取2 cm带芽茎段，用含碱性洗涤剂的清水清洗干净。
1.3.2 培养基的配制与灭菌 基本培养基为MS培养基，加琼脂6.3 g/L，激素为6-BA（6-苄基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）。将配制好的MS培养基（pH调至5.9左右）分装在90个培养瓶中（每瓶50 mL接种3个茎段，每个处理有10瓶重复）。分装好的培养基120 ℃高温高压蒸汽灭菌20 min。
1.3.3 正交试验 采用L9（34）正交试验对6-BA（A）、NAA（B）、蔗糖（C）进行设计，正交试验因素与水平见表1。
2 结果与分析
正交试验结果与极差分析如表2所示。由表2可知，影响黑玫瑰石竹不定茎分化的影响因素大小顺序为B、A、C，最佳组合为A2B2C1（C3），即6-BA 0.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L、蔗糖 20（40） mg/L。
黑玫瑰石竹茎段接种在5号（6-BA 1.0 mg/L， NAA 0.2 mg/L，40 g蔗糖）的MS培养基上芽的分化率最高。通过观察可以发现，5号培养基上的试管苗长势最好（图1A）。由于正交设计的试验中不包括A2B2C1组合，又进行了A2B2C1组合试验研究，结果见图1B，试管苗在此培养基组合中长势确实也很好。
综上所述，由于蔗糖的浓度变化对黑玫瑰石竹出芽生长影响不大，选择最适宜黑玫瑰石竹出芽的培养基为MS+0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+20 g/L 蔗糖。
3 小结与讨论
外源激素对于黑玫瑰石竹试管苗芽的增殖分化有着显著的影响，6-BA是细胞分裂类激素，对于细胞的分化及出芽有着必要的作用[4]。NAA是生长素类激素，对于外植体的生根有重要作用[5]。当选择1.0 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA的MS培养基时不定芽的增殖效果较好。MS培养基具有高浓度的无机盐，高含量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，同时含有一定数量的铵盐，而且营养丰富，能加速愈伤组织和培养物生长的作用，因此是目前应用最广泛的培养基。王家福[6]的研究结果表明，当植物生长类激素/细胞分裂类激素>1时不利于芽的分化；当植物生长类激素/细胞分裂类激素=10或者5时更利于形成根；当植物生长类激素/细胞分裂类激素
