关键词：珍珠黄杨;RAPD;反应体系;正交设计
Research on Optimization of RAPD Reaction Systems for Buxus sinica var.parvifolia
JIANG Zi-hong
（Chuzhou Vocational and Technical College，Chuzhou，Anhui 239000，China）
Key words： Buxus sinica var.parvifolia; RAPD;reaction system;the orthogonal design method
珍珠黄杨（Buxus sinica var.parvifolia）属黄杨（B.sinica）变种，又名小叶黄杨、鱼鳞黄杨、鱼鳞木，具有生长慢、枝干茂密挺拔、树型稳定紧凑等特点，是制作袖珍园林的绝佳材料。主要产于江西庐山、福建崇安黄岗山、浙江龙荡山、湖北神农架、安徽歙县清凉峰等地。
RAPD（Random amplified polymorphic DNA）是美国科学家Williams和Welsh（1990 年）几乎同时发展起来的一项技术，该技术具有简便、迅速、准确等优点，广泛应用于生物多样性监测、生物育种、遗传定位等领域。RAPD在园林植物（杨树、红叶石楠、苦楝等）上的研究被广泛报道，但关于 RAPD 标记技术在珍珠黄杨上的应用未见报道，本研究拟建立最优珍珠黄杨RAPD反应体系，为进一步开展珍珠黄杨研究提供参考。
1 材料和方法
1.1 试验材料
供试材料为：珍珠黄杨（安徽省黄山市歙县清凉峰和江西省上饶市玉山县三清山野生种群）。
采集野外珍珠黄杨叶片，利用改良CTAB―硅珠法[4]提取珍珠黄杨叶片中总DNA。
RAPD扩增反应随机抽取一个野生珍珠黄杨的DNA样本，利用随机引物HY-36（CCCCCCTTAG），在MJ Research.Inc PTC-220型PCR仪上进行扩增[5]。扩增程序：94 ℃预变性5 min，然后变性40 s，接着36 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，循环39次，最后在72 ℃延伸5 min。
2 结果与分析
2.1 对珍珠黄杨RAPD最佳反应体系温度梯度的分析
2.2 单因素方法筛选扩增体系
