摘要：试验从四川省攀枝花市朱家包包钒钛磁铁矿区的表层土壤中筛选出21株钒抗性微生物，经16S rRNA基因测序鉴定可知，筛选所得的微生物分别属于放线菌纲、α-变形菌纲、β-变形菌纲和γ-变形菌纲。这些菌株的获得将为钒污染地区微生物资源的开发利用及矿区生态修复提供理论和技术支持。
关键词：钒；抗性微生物；筛选
Abstract： 21 strains of microorganisms with vanadium-resistance were screened from the surface soil at ZhuJiaBaoBao V-Ti-bearing magnetite， Panzhihua. The results of sequencing 16S rRNA gene showed that these bacterial strains were belonged to Actinobacteridae， α-proteobacteria， β-proteobacteria and γ-proteobacteria， respectively. It will provide a theoretical and experimental supports for future exploitation of microbial resource in vanadium-polluted area and bioremediation of the vanadium mine area.
Key words： vanadium； metal-resistant microorganism； screening
基于微生物对重金属的积累和解毒作用，近年来以净化有毒金属污染为目的的生物修复技术正在兴起。微生物修复技术因其处理费用低、效率高、对环境影响小等优点，越来越受到广泛的关注[6-9]。
四川省攀枝花市朱家包包钒钛磁铁矿区位于攀枝花兰家火山矿区东部，在该矿开采期间，产生大量粉尘、废水和废渣，这些废弃物中含有大量的钒，通过扬尘、雨水冲刷等途径扩散到周围环境中，致使与该矿毗邻的水资源、农田土壤受到严重的重金属污染。为此，希望通过筛选一批重金属钒的抗性细菌，为矿区钒污染的生态修复提供菌种储备。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品采集
试验土样采自四川省攀枝花朱家包包钒钛磁铁矿区，采集表层（0～20 cm）土壤。土壤pH 8.03，土壤有机质含量为2.52±0.04 g/kg。土壤中V、Cr、Pb、Ni、Zn全量采用HF-HNO3-HClO4消煮，原子吸收法 （PerkinElmer AAS800，美国）进行测定[13]（表1）。
重金属钒的加入，分别用浓度为1 000 mg/L的硫酸氧钒和偏钒酸钠标准溶液稀释得到所需浓度。
将测序公司反馈回来的测序结果，运用DNAMAN软件将两端引物以外的序列去除，余下的序列提交到模式菌种库进行比对。将菌株序列及其相似度最高的模式菌种序列用DNAMAN软件构建系统发育树并进行16S rRNA基因同源性分析，发育树的构型和稳定性用DNAMAN软件取样分析1 000次，进行Bootstrap值分析和评价。
2 结果与分析
2.1 序列分析
2.2 系统发育树分析
3 小结与讨论
微生物作为人类最宝贵、最具开发潜力的资源宝库，种类繁多、分布广泛，具有繁殖迅速、个体微小、比表面积大、对环境适应能力强等特点。在受重金属污染的生态环境中，微生物产生各种变化以适应重金属的胁迫。筛选耐重金属细菌的一般途径是在培养基中加入特定的金属，再逐步提高该重金属浓度的驯化条件下，经多代传种而获得目的菌株。
参考文献：
[2] 王 夔.生命科学中的微量元素[M].北京：中国计量出版社，1996.
[5] 文香兰，沈桂月，文永植.钒毒性的研究进展[J].广东微量元素科学，1997，4（10）：9-11.
[8] 刘玉燕，刘 敏，刘浩峰.城市土壤重金属污染特征分析[J].土壤通报，2006，37（1）：184-188.
[9] 罗 强，任永波，郑传刚.土壤重金属污染及防治措施[J].世界科技研究与发展，2004，26（2）：42-46.
[13] 鲁如坤.土壤农业化学分析方法[M].北京：中国农业科技出版社，1999.
[15] 胡稳奇，张志光.PCR技术在环境微生物检测中的应用[J].环境科学，1994，15（4）：80-83.
